低能离子束改良烃降解菌的机理研究

本研究拟通过构建烃降解菌低能离子束改良体系的并研究离子束与烃降解菌的相互作用机理。石油烃污染日益引起重视，微生物修复由于具有成本低、操作方便、作用持久等优点，是石油污染土壤和水体修复的主要方式。而解烃菌的菌株改良及其在烃污染环境中的动态分布等基础性研究就成为关键性的科学问题。将低能离子束用于烃降解菌的诱变改良，建立与完善离子束诱变筛选体系，并进一步研究其相关诱变机理；利用报告基因，构建高效表达盒，利用离子束介导的方法导入烃降解菌，研究离子束介导转基因的机理；报告基因作为标记研究其在污染环境中的动态分布规律，为进一步揭示其生物修复机理提供理论支持。该研究具有较大的理论意义和应用价值。

本研究根据评审专家的建议，围绕烃降解菌的筛选和改良工作，取得实质性进展。由油田采集的土样和水样，通过血琼脂平板和油平板交替筛选，结合摇瓶发酵评价，获得50多个有价值和有潜力的烃降解菌株，利用单个菌株进行摇瓶好氧培养，周降解率稳定在40%以上，而且可利用废弃油脂产表面活性剂。经低能离子束与紫外线诱变，结合正交、响应面优化，糖脂产量和石油烃降解率进一步提高。Z1、Z41和Z49等菌株经鉴定为铜绿假单胞菌(一种条件致病菌)，但绿脓菌素在肉汤培养基的产量甚微，对环境友好安全。耐渗透压、耐盐性较好，可望在今后结合废弃植物油生物促进技术在江苏沿海滩涂的环境生物修复中得到应用。对8-18进行了离子束诱变及二次诱变，获得突变株23A和23A-3。由加油站附近污染土壤分离到一株好氧共代谢降解三氯乙烯的假单胞菌属菌株Em-1，对其进行了形态学、生理生化和分子鉴定，并对其生长条件进行了优化。在含200mg/L甲苯和50mg/L三氯乙烯的无机盐培养基中，经7d摇瓶培养，三氯乙烯生物去除率达29.6%。拟下一步进行离子束诱变改良。基本上完成预定的研究内容。