水泡性口炎病毒磷酸蛋白氨基端磷酸化的功能研究

Vesicular Stomatitis Virus (VSV) is a prototypical member of the Non-segmented Negative Stranded RNA Viruses, which contains many human and animal pathogens, such as measles virus, respiratory syncytial virus,parainfluenza virus and rabies virus. Highly phosphorylated RNA polymerase cofactor-Phosphoprotein (P) of VSV is essential for viral RNA synthesis.It is known that the N-terminus of P protein is phosphorylated by cellular casein kinase II, however, the effect of phosphorylation on transcription always keeps controversial. In this proposal, we will first definte whether phosphorylation regulate the oligomerization of P protein and RNA polymerase formation. Secondly, the role of phosphorylation in transcription/replication will be directly identified using in vitro and in vivo system respectively. Finally, relocalization, temperature sentisivity and regulating development of functional N-RNA template(N protein specifically encapsidates the viral RNA by interacting with P protein)will be explored.Therefore, accomplishment of this study not only will definite the detailed mechanism played by N-terminal phosphoryaltion of P protein in viral replication cycle,but also may result in a new strategy in treating infection and transmission caused by non-segmented negative stranded RNA viruses, as phosphosrylation site of P protein by host kinase regulates these viruses replication are investigated as a potential target of therapeutic intervention.

水泡性口炎病毒是不分节负链RNA病毒的典型代表（包括很多能引起人类严重传染病的病毒如：麻疹病毒、呼吸道合胞病毒、副流感病毒和狂犬病毒等）。与不分节负链RAN病毒其它成员的磷酸蛋白（P）相似，其高度磷酸化的聚合酶辅因子P蛋白是病毒RNA合成不可缺少的。P蛋白氨基端能被细胞的酪蛋白激酶磷酸化,但长期以来对磷酸化的功能研究却一直存在争议。为此，本研究将首先明确磷酸化对P蛋白寡聚化和聚合酶形成的调节；其次，在体外澄清磷酸化是否直接调节转录；然后，在体内进一步鉴定磷酸化对转录和复制的影响。最后，我们将明确磷酸化突变体在细胞内分布、在不同温度下的活性以及对N-RNA模板形成的调节。因此，本研究的开展不仅明确了P蛋白磷酸化在复制循环某一阶段中的具体作用机制，而且为防御其它不分节负链RNA病毒的感染和传播提供了一个新的策略：即把激酶对P蛋白的磷酸化位点作为一个潜在的治疗干预靶点。

水泡性口炎病毒是不分节负链 RNA 病毒的典型代表（包括很多能引起人类严重传染病的病毒如：麻 疹病毒、呼吸道合胞病毒、副流感病毒和狂犬病毒等）。与不分节负链 RAN 病毒其它成员的磷酸蛋白 （P）相似，其高度磷酸化的聚合酶辅因子 P 蛋白是病毒 RNA 合成不可缺少的。P 蛋白氨基端能被细胞 的酪蛋白激酶磷酸化,但长期以来对磷酸化的功能研究却一直存在争议。本研究揭示了磷 酸化对P 蛋白寡聚化和聚合酶形成非常重要；另外，通过体外的转录重构实验，证明磷酸化直接调节转录；随后，进一步在体 内鉴定磷酸化对病毒也是不可缺少的转录和复制的影响。因此，本研究的开展不仅明确了 P 蛋白磷酸化在复制循环 某一阶段中的具体作用机制，而且为防御其它不分节负链 RNA 病毒的感染和传播提供了一个新的策 略：即把激酶对 P 蛋白的磷酸化位点作为一个潜在的治疗干预靶点。