转录因子RFX1对CD4+T细胞CD11a和CD70基因表达的调控及其在系统性红斑狼疮发病机制中的作用

目前研究已证实CD11a和CD70等基因过度表达是导致T淋巴细胞异常活化及系统性红斑狼疮（SLE）发病的重要机制之一，然而上述基因过度表达的分子机制尚未完全阐明。我们通过转录因子活性谱芯片检测发现SLE患者CD4+T细胞中RFX1转录调控活性明显下调。生物信息学预测CD11a和CD70基因转录起始位点上游存在RFX1结合位点。抑制Jurkat细胞中RFX1表达，可导致上述基因表达升高。以上结果提示SLE患者CD11a和CD70基因过度表达与RFX1表达下降密切相关。本研究拟在前期实验的基础上，探讨RFX1调控CD11a和CD70基因表达的分子机制；进一步揭示外周血CD4+T细胞中RFX1表达降低在SLE发生、发展中的作用。本项目将有助于进一步阐明SLE发病的分子机制，并有可能为SLE的治疗提供新的思路和途径。

系统性红斑狼疮（Systemic Lupus Erythematosus, SLE）是一种多器官、多系统受累，严重危害人类健康的自身免疫性疾病。CD4+ T细胞异常活化是SLE的重要免疫学特征之一。异常活化的CD4+T细胞分泌大量炎性细胞因子，刺激B细胞产生自身抗体，引起多种器官出现炎性细胞浸润及局部补体异常活化，最终导致器官损伤。以往研究已证实CD11a和CD70等基因过度表达是导致T淋巴细胞异常活化及系统性红斑狼疮（SLE）发病的重要机制之一，然而上述基因过度表达的分子机制尚未完全阐明。本项目利用转录因子活性芯片、定量PCR及western blot筛选并证实转录因子RFX1在SLE患者CD4+ T细胞中表达水平和活性较正常对照显著降低。通过生物信息学分析、染色质免疫共沉淀实验（ChIP）及萤光素酶报告基因分析证实RFX1可调控甲基化敏感基因CD11a和CD70表达，并且利用免疫共沉淀实验（IP）和间接免疫荧光染色法揭示RFX1蛋白可招募共抑制因子表观遗传修饰酶DNMT1、HDAC1和SUV39H至CD11a和CD70基因启动子区。在正常人CD4+T细胞中特异性抑制RFX1表达，real-time PCR、流式细胞检测及ELISA显示CD4+ T细胞中甲基化敏感基因CD11a和CD70表达水平显著升高、T细胞的自身反应性增加，亚硫酸盐测序结果表明CD11a和CD70基因启动子甲基化水平较对照组显著降低，而ChIP-qPCR实验证实CD11a和CD70基因启动子区组蛋白乙酰化水平显著升高、组蛋白H3K9三甲基化水平显著降低。相反，我们在SLE患者CD4+ T细胞中过度表达RFX1，CD11a和CD70基因表达水平被显著下调，从而逆转了SLE T细胞的自身反应性。CD11a和CD70启动子甲基化水平被显著提高，而其组蛋白乙酰化水平显著下降、H3K9三甲基化水平显著升高。通过以上研究，我们揭示转录因子RFX1表达和活性下调是导致SLE患者CD4+T细胞异常活化、自身反应性增加的重要机制之一，证实RFX1是SLE治疗的新靶点。同时，本研究揭示了RFX1调控靶基因CD11a和CD70转录的表观遗传机制，丰富了SLE发病的表观遗传调控机制理论，为全面揭示SLE T细胞异常表观遗传调控网络奠定基础。