前列通窍胶囊对膀胱出口梗阻大鼠膀胱血流及缺氧状态的调节机制研究

Previous study demonstrated Qianlietongqiao Capsule can promote apoptosis of the detrusor muscle cells and evidently reduce the expression of NGF and bFGF in detrusor in benign prostatic hyperplasia（BPH） rats. And it has been reported in the literature that the persistent bladder outlet obstruction（BOO）induced by BPH can result in decreased blood flow and hypoxia in the bladder.Nevertheless，whether or not Qianlietongqiao Capsule can regulate bladder blood flow（BBF）and mitigate hypoxia of bladder after BOO remains undefined.And the above-mentioned is a key scientific problem which needs to be resolved.To reveal the targets and mechanism of Qianlietongqiao Capsule further，we will creat partial BOO rat models through the ligation of prostatic urethra using polypropylene suture and BOO rats are treated with drugs by gavage.Then the Fluorescent Microspheres Technique for determining BBF is requisite.And we will isolate and culture detrusor smooth muscle cells（DSMCs）of SD rats using collagenase digestion method.The hypoxia models of DSMCs will be established in a hypoxic chamber in which DSMSs will be treated with Qianlietongqiao Capsule-containing serum.DSMCs’ viability and the expression of HIF，VEGF，TGF-β，TNF-α and so forth in the bladder and DSMCs are determined by immunohistochemistry technique，Western Blot and RT-PCR.Through this project，partial mechanism of Qianlietongqiao Capsule used for protecting bladder function after bladder outlet obstruction will be uncovered and meanwhile it lays a theoretical basis for the further develop of new Chinese patent medicine which will be used for treating BOO-induced bladder dysfunction.

前期研究证实前列通窍胶囊可促进良性前列腺增生（BPH）大鼠膀胱逼尿肌细胞凋亡，并明显降低BPH大鼠膀胱逼尿肌中NGF、bFGF表达。文献报道BPH所致的持续性膀胱出口梗阻（BOO）可以造成膀胱血流下降和缺氧，而前列通窍胶囊是否具有调节BOO后膀胱血流和改善其缺氧状态的作用正是该项研究要解决的关键科学问题。为进一步揭示该药的作用靶点和机制，采用聚丙烯缝线将SD大鼠前列腺部尿道进行部分结扎以造成BOO大鼠模型后灌胃给药，利用荧光微球技术检测膀胱血流，采用胶原酶消化法分离培养SD大鼠膀胱逼尿肌细胞，通过缺氧小室建立缺氧模型，用前列通窍胶囊含药血清干预，采用免疫组化、Western Blot、RT-PCR等技术检测细胞活性及HIF、VEGF、TGF-β、TNF-α等在膀胱中的表达，以此揭示该药保护BOO后膀胱功能的部分作用机制，为进一步开发治疗BOO所致膀胱功能障碍的中药新药奠定理论基础。

膀胱出口部分梗阻可造成膀胱血流下降和组织缺氧。前期临床研究表明前列通窍胶囊可改善前列腺增生症患者下尿路症状，对膀胱功能具有保护作用，但前列通窍胶囊对膀胱部分出口梗阻所致的膀胱血流下降及组织缺氧是否具有改善作用尚不清楚，其对部分梗阻性膀胱的保护作用机制值得探索。本研究旨在通过体内外实验，明确前列通窍胶囊对膀胱出口部分梗阻大鼠膀胱血流的调节作用及其抗膀胱缺氧性能，以期在一定程度上揭示前列通窍胶囊对膀胱出口部分梗阻大鼠膀胱的保护作用机制。在体内实验中，分别构建了膀胱出口部分梗阻大鼠模型和良性前列腺增生大鼠模型，并采用前列通窍胶囊官位治疗，结果显示：前列通窍胶囊可有效提高膀胱出口部分梗阻大鼠膀胱血流，抑制HIF-1α表达，体现出抗组织缺氧性能，同时，前列通窍胶囊对膀胱出口部分梗阻大鼠膀胱组织纤维化、膀胱壁增厚、炎症及VEGF、TGF-β1、CTGF、Collagen I、Collagen III、α-SMA、Desmin、Vimentin、TNF-α的表达具有显著抑制作用；前列通窍胶囊可有效抑制良性前列腺增生大鼠膀胱湿重和指数增加，改善膀胱组织病理，抑制NGF、bFGF、TGF-β1、Bcl-2的表达，促进Bax的表达，并明显下调Bcl-2/Bax比例。在体外实验中，分离、培养并鉴定了大鼠原代膀胱平滑肌细胞，体外低氧环境下原代膀胱平滑肌细胞形态由梭形变为宽大畸形，且HIF-1α/VEGF信号激活，前列通窍胶囊含药血清可抑制低氧环境下大鼠BSMCs中HIF-1α和VEGF表达升高。此外，前列通窍胶囊君药黄芪的主要有效成分黄芪多糖可抑制低氧环境下大鼠BSMCs中HIF-1α和Connexin43表达升高。最后，还利用网络药理学和分子对接技术对前列通窍胶囊治疗膀胱出口部分梗阻的作用机制进行了探讨。综上，前列通窍胶囊可提高膀胱出口部分梗阻大鼠膀胱血流，且具有抗膀胱组织缺氧性能，其通过多途径、多靶点对部分梗阻性膀胱损伤起到改善作用，该研究为进一步将前列通窍胶囊开发为治疗梗阻（如：良性前列腺增生）所致膀胱结构与功能损害的中药新药奠定了部分理论基础。