益气活血法协同调控Notch与Wnt通路诱导脑缺血血管神经再生的作用及机制研究

Rebuilding vascular collateral circulation and remodeling neural structures become a hot spot in the reseach on ischemic stroke .At present the reseach on Neuro-vascular unit is limited in separate regulation through Notch and Wnt signal transduction pathways,the reseach of synergybetween both is more rare.Based on the reseach of ischemic stroke in early time and the theory of removing stasis and promoting new,and on the premise of the combination of disease and syndrome,we will use invigorating qi and activating blood law and take the place of invigorating qi and activating blood law with ZhongFong plaster to observ the effect of vascular and neural regeneration from the neural function defect,the size of cerebral infarction,the changes of Morphology,the expression of positive cells which marked the vascular and neural regeneration by establishing focal cerebric ischemic reperfusion injury model on rat and Hypoxia-reoxygenation injury of cell model,and to discover the biologic mechanism of invigorating qi and activating blood law on vascular and neural regeneration from the new perspective of Notch and Wnt signal transduction pathway's synergetic regulating and control on vascular and neural regeneration.This research will provide technology platform and theoretical foundation for Ischemic stroke'therapy.

重建侧支循环及重塑神经结构现成为缺血性脑卒中研究的热点。目前从Notch 和 Wnt 信号通路对神经血管单元的研究仅局限于单独调控，对于二者协同作用的研究尚为鲜见。本课题在前期对缺血性脑卒中研究的基础上，在病证结合前提下，基于中医祛瘀生新理论，采用益气活血法，借助在体局灶性脑缺血再灌注损伤动物模型及离体缺氧复氧损伤细胞模型，以方（中风膏）代法，从神经功能缺损症状、脑梗死体积、缺血区组织形态改变、缺血区血管神经新生为标志的阳性细胞的表达及Transwell小室迁移实验和小管形成实验等方面观察益气活血法诱导缺血性脑卒中血管神经再生的效应。并从整合研究Notch与Wnt信号通路在血管神经再生中协同调控作用的新视角，及采用二者特异性阻断剂为工具药，深入探讨益气活血法诱导缺血性脑卒中血管神经再生的作用靶点及分子生物学机制，为临床缺血性脑卒中的治疗提供技术平台和奠定理论基础。

缺血性脑卒中是世界上最常见的死亡原因之一，具有高发病率，高致残率和高复发率的特点，给社会和家庭造成了沉重的负担。溶栓和神经保护是其主要的治疗方法，溶栓药由于时间窗的限制及可能导致颅内出血风险，限制了该类药的临床运用。神经保护是治疗缺血性脑卒中的重要方法之一，但在目前临床治疗中却收效甚微。由于患者最终的神经功能的恢复需要通过血管生成和神经再生，然而,内源性修复和再生的程度不足以恢复脑缺血性损伤和脑缺血造成的残疾或死亡。因此，通过中医药促进内源性再生修复，是一个有希望的治疗策略。. 缺血性脑卒中主要病机为气虚血瘀，“益气活血法”为中医治疗缺血性脑卒中的基本方法，有着明确的不可替代的作用。体现“益气活血法”的“中风膏”为甘肃省中医院院内制剂，以古方“佛手散”(当归、川芎)为基础，重用岷当归(达药典规定的6倍)，配伍黄芪、丹参、赤芍、羌活、甘草等药物，具有较强的益气活血，化瘀通络的功效，为益气活血法的代表方药之一。本课题组前期临床及实验研究表明：体现“益气活血法”的“中风膏”能够有效降低血黏度、抑制颈动脉粥样斑块、抑制血小板聚集、减轻钙超载、抑制神经细胞凋亡等，具有明确的神经保护和改善微循环作用及良好的临床疗效。我们考虑中风膏是否对脑缺血再灌注后血管生成具有促进作用？其作用机制是否是通过Notch和Wnt信号通路来实现的？因此，本课题在前期对缺血性脑卒中研究的基础上，基于中医“祛瘀生新”理论，对采用“益气活血法”治疗脑梗死急性期的临床研究进行了循证研究，并对体现“益气活血法”的中风膏进行了质量标准研究。基于基因芯片技术，从分子机制方面观察中风膏对局灶脑缺血/再灌注大鼠脑组织基因表达的影响，探讨了中风膏治疗缺血性脑卒中可能的作用靶点及作用机制。同时，借助离体缺氧复氧损伤脑微血管内皮细胞模型模拟脑缺血再灌注损伤及局灶性脑缺血再灌注损伤模型，采用生物化学、分子生物学等研究手段，从整合研究Notch与Wnt信号通路在血管生成中协同调控作用的新视角，探讨“益气活血法”对缺血性脑卒中血管生成的效应、作用靶点及机制，为将来精确调控内源性脑血管生成实现中枢神经系统损伤后的组织修复与功能重建提供理论依据，也为缺血性脑卒中的治疗提供治疗策略与新思路。