基于血脑双通道微透析与分子影像技术研究养阴通脑颗粒组分配伍方抗脑缺血损伤的作用机制

The medicinal ingredients of Chinese medicine play an important role in treatments, not only into the blood, but also into the brain. Traditional methods of serum pharmacology studies have limitations. This project utilize Yang-yin-tong-nao particles (YYTNP) as the object, by blood and brain dual-channel microdialysis, molecular imaging , chemical separation, computer technology and other methods, The ingredients of YYTNP particle are separated and analyzed in four main active parts (flavonoids, alkaloids, saponins, volatile oil) , composed of nine different combinations by orthogonal design. Microdialysis-HPLC technique to establish releasing changes of four amino acids and microdialysis-HPLC/FLD, HPLC/UVD and LC/MS technique in conscious activity in rat brain and determine concentrations and neurotransmitter release of drug in jugular vein-brain dual channels using triple brain microdialysis probes.18F-FPIT, a special metabotropic glutamate receptors labeled imaging agents, to track changes of the amino acids by Micro-PET molecular imaging. Establish "time-concentration-effect" three-dimensional linear dynamic models and explore the mechanism for YYTNP Chinese medicine as a whole-dynamic-simultaneous analysis targeting anti-cerebral ischemia.

药物需入血，并能通过血脑屏障入脑才能充分发挥治疗脑病效应，传统血清药理学研究方法的限制，影响其深入研究。本项目以养阴通脑颗粒为对象，采用血脑双通道微透析、分子影像、化学分离分析、计算机技术等方法，分离分析养阴通脑颗粒抗脑缺血效应的4个主要有效部位（黄酮，生物碱，皂苷，挥发油），正交设计L9（34）9个组分配伍方，建立血脑双通道三联探针微透析-HPLC/FLD、HPLC/UVD和LC/MS技术同步检测大鼠脑内4种氨基酸类神经递质（Glu，Asp，Tau，γ-GABA）释放及血、脑中指标性成分（黄芪甲苷，葛根素，川芎嗪，藁本内酯）浓度的方法，并以mGluR特异性受体显像剂18F-FPIT对氨基酸释放效应进行动态追踪及MicroPET监测养阴通脑颗粒组分配伍方对脑缺血模型病变区域脑血流、脑功能和脑代谢的变化。建立时间-浓度-效应的三维线性动态模型，探讨养阴通脑颗粒抗脑缺血损伤的作用机制。

药物需入血，并能通过血脑屏障入脑才能充分发挥治疗脑病效应，传统血清药理学研究方法的限制，影响其深入研究。本项目以养阴通脑颗粒为对象，采用血脑双通道微透析、化学分离分析、计算机技术等方法，在以往研究基础上完善分离分析并制备养阴通脑颗粒抗脑缺血效应的主要有效部位（黄酮、生物碱、皂苷、挥发油等），建立血脑双通道三联探针微透析-HPLC技术同步检测大鼠脑内4种氨基酸类神经递质（Glu、Asp、Tau、γ-GABA）释放及血、脑中指标性成分（黄芪甲苷、葛根素、川芎嗪等）浓度的方法；制作大鼠等动物脑缺血再灌注模型，同步动态测定体内药动学、药效学指标，建立时间-浓度-效应的三维线性动态模型，探讨养阴通脑颗粒抗脑缺血损伤的作用机制。. 本项目首次建立血脑双通道三联探针微透析高效液相联用技术实时、动态同步分析养阴通脑颗粒有效部位不同配伍组方在血、脑内的分布、代谢变化及缺血再灌注过程脑内氨基酸类神经递质释放量的变化，该方法突破了传统的中药复方血药浓度的分析方法，创立了多成分的药物研究方法，建立中药有效成分与药效（增效、减毒）模型。 以氨基酸的释放效应为作用靶点，结合药物指标性成分在血、脑内的浓度变化，探讨有效成分与药理作用的相关性，阐述养阴通脑颗粒复方多成分与药效的时效关系和量效关系的相关性，确定养阴通脑颗粒抗脑缺血性损伤的治疗作用靶点，优化给药方案，指导临床合理用药。. 通过项目研究，取得了较好的研究成果，并将相关研究成果发表论文4篇，完成科学技术成果登记1项，并获得浙江省科学技术进步奖（省部级）二等奖1项，浙江省中医药科学技术奖（厅局级）一等奖1项，出版专著1部，培养研究生2名，本科生3名。