人胚胎干细胞免疫治疗卵巢癌的可行性及安全性的研究

人胚胎干细胞与癌细胞可能共享一些抗原，用胚胎干细胞免疫可以通过交叉免疫反应起到抗肿瘤的作用，还有可能从根本上消灭肿瘤干细胞。2009年申请者在国际上首次报道了用人胚胎干细胞免疫治疗小鼠结肠癌，观察到抗瘤效果。本研究拟先用免疫组化方法筛选人卵巢上皮癌与胚胎干细胞是否共同表达CA125等已知抗原。然后利用Fischer344大鼠上皮性卵巢癌腹腔瘤模型，进行人胚胎干细胞抗卵巢癌的体液和细胞免疫研究。比较2种人胚胎干细胞治疗组、大鼠胚胎干细胞对照、大鼠卵巢癌细胞对照、空白对照组动物生存期，取脾细胞分析淋巴细胞群的变化，用ELISPOT测定脾淋巴细胞分泌IFN-r、IL-4、GM-CSF等细胞因子的变化。用免疫荧光法和免疫组化评判自身免疫疾病及胚胎干细胞成瘤性的副作用。观察免疫记忆反应。并选3例患者进行人胚胎干细胞诱导自体DC，然后激活T细胞杀伤自体肿瘤的实验。相信人胚胎干细胞疫苗治疗卵巢癌有前景。

课题组首先成功建立了大鼠及小鼠卵巢癌模型，利用人胚胎干细胞及小鼠胚胎干细胞分别免疫大鼠及小鼠，实验显示胚胎干细胞疫苗能够抑制免疫大鼠和小鼠的卵巢癌生长，延长肿瘤接种后的动物生存期，在大鼠模型中实验组远处转移的发生率低于对照组。实验证实胚胎干细胞免疫能够产生抗卵巢癌的细胞免疫和体液免疫反应，外周血中Th1/Th2/Th17细胞因子检测显示IL-2水平实验组较对照组增高，差异有统计学意义。免疫组化实验发现人胚胎干细胞H9表达HER-2、C-myc、P53、nm23、NSE、PTEN、PLAP、HPL、CK、MBP、Vimentin等肿瘤相关抗原，这提示胚胎干细胞存在着抑制肿瘤转移、起到抗肿瘤作用的物质基础。进一步研究发现，免疫后大鼠血清分别与胚胎干细胞及卵巢癌细胞裂解液提取蛋白行Western blot杂交发现一些特异性条带，推测胚胎干细胞可能通过一些与卵巢癌细胞共同表达的抗原产生免疫后交叉反应起到抗卵巢癌作用，但是到底是何种抗原尚有待进一步的分离鉴定实验来揭示。人胚胎干细胞细胞免疫的大鼠健康状况良好，无脱毛、关节肿胀等自身免疫性疾病的临床证据。在12周内动态检测大鼠全血细胞计数、肝肾功能，结果显示各组之间差异无统计学意义，以上初步证明了人胚胎干细胞作为疫苗的安全性。课题组基本完成了实验的设计计划，达到了实验的目的，于国内核心期刊发表关于小鼠卵巢癌模型建立的论著一篇，SCI收录期刊发表关于胚胎干细胞疫苗抗卵巢癌作用的论著两篇，培养博士研究生两名。该课题首次从不同动物模型、相同及不同种属间胚胎干细胞抗卵巢癌作用进行验证，首次对胚胎干细胞疫苗的安全性进行了阐述。同时发现了一些有待于研究的胚胎干细胞和肿瘤共享抗原类物质，为胚胎干细胞疫苗的实用性研究奠定了一定的理论基础。