肝细胞癌早期诊断血清自身抗体标志物的筛选与分析

在肿瘤的发生发展过程中，由于机体免疫状态的变化，患者体内会出现针对某些自体细胞抗原的抗体免疫反应。通过检测血清中这些特异性自身抗体，有可能实现肝细胞癌的早期诊断。本研究采用血清免疫蛋白质组学方法，分别以早期肝细胞癌组织及肝癌细胞系总蛋白作为抗原库，通过检测早期肝细胞癌血清，大量筛选早期肝细胞癌中存在的潜在血清自身抗体标志物；应用蛋白芯片制备技术将初筛的血清自身抗体标志物20-30种集成到一块芯片上，制成蛋白芯片；选择1500例不同临床分期的肝细胞癌阳性和阴性血清标本，包括回顾性和前瞻性随访标本，用制备的蛋白芯片进行检测，通过大临床样本对初筛的标志物进行进一步的筛选和验证，以获得具有临床诊断意义，可用于肝细胞癌早期诊断的特异性血清自身抗体标志物；最后对筛选的标志物在肝细胞癌早期出现的可能机理进行分析。本项目的实施有助于肝细胞癌的筛查和早期诊断，对提高肝细胞癌患者的治愈率和生存率具有重要意义。

肝细胞癌（Hepatocellular Carcinoma，HCC）的早期诊断非常重要，但目前临床缺乏HCC筛查和早期诊断方法。本项目采用血清免疫蛋白质组学方法，分别以早期HCC组织及HCC细胞系总蛋白作为抗原库，通过检测早期HCC以及对照血清中的自身抗体水平，初筛并选择22种早期HCC相关自体抗原，通过蛋白芯片技术将集成到一块芯片上，制成蛋白芯片；应用制备的蛋白芯片检测了966例不同临床分期的HCC阳性和阴性血清标本，对初筛的标志物进行了进一步的筛选和验证。结果显示Centromere protein F (CENPF)、Insulin-Like Growth Factor 2 mRNA-binding Protein 2 （IMP2）、60 kDa heat shock protein(HSP60)、Protein disulfide-isomerase(P4HB)、Alpha-enolase(ENO1)、Calreticulin（CRT32）、Aminoacylase-1(ACY1)、Ig kappa chain C region(IGKC)以及Regucalcin （RGN）等9种自体抗原具有较好的区分效果，差别均具有统计学意义，检测HCC的敏感度为43.2%-80.6%，特异性为49.5%-81.3%。值得注意的是，与AFP抗原的阳性率随着肿瘤的进展而升高不同，上述自身抗体的阳性率一般在肿瘤早期较高，然后随着肿瘤的进展而下降，在特异度相似的情况下，CENPF、IMP2、HSP60检测早期HCC（肿瘤I期）的敏感度（75.3%-85.7%）均优于AFP的敏感度（50.6%），CENPF、HSP60、IMP2及ACY1能够检出68%-79.2%的AFP阴性I期HCC及69.0%-83.3%的AFP阳性I期HCC，显示其在HCC早期诊断方面的潜在价值。通过检测10例不同CENPF抗体水平的HCC中CENPF蛋白的表达状况，结果提示，作为在肿瘤发生过程中细胞增殖必须的关键蛋白之一，CENPF的过表达有可能导致CENPF自身抗体水平的升高并在肿瘤早期出现。. 本项目的研究结果为从血清自身抗体水平角度进行HCC的筛查和早期诊断提供了可能性，通过在此基础上进一步完善机理分析并应用于临床，对HCC的早期诊断从而提高HCC患者的治疗水平具有重要意义。