扶肾颗粒调控EMT信号串话网络干预腹膜纤维化的机制研究

Peritoneal fibrosis(PF) in the long process of peritoneal dialysis(PD) is critical factor of technical failure,so effective control and prevention of PF is important to improve the long-term efficacy of PD.EMT in the early stage is reversibLe and effective regulation of EMT can inhibit and reverse PF.The research in previous National Natural Science Foundation of China project, confirmed that FuShenKeLi effectively intervene in the development of PF by the regulation of EMT induced by TGF- β1 and α-SMA expression in mesothelial cells.The research on "the regulation of TGF-β1 signal network can delay or even reverse EMT, effectively inhibit PF " hypothesis, combined with the pathologic morphology, molecular biology technology,explore intervention of EMT and the mechanism of FuShenKeLi to regulate the keys of EMT pathways crosstalk by the uremic PD composite rat model and mesothelial cell 3D model.At the same time,select the better Chinese Medcine,fingerprint and preliminary analysis of its effective components lay the foundation for further research .

腹膜纤维化系腹膜透析技术性失败关键因素，有效防控腹膜纤维化对提高腹膜透析远期疗效具重要意义。腹膜纤维化早期上皮细胞-间充质细胞转分化（EMT）阶段具有可逆性，有效调控EMT可阻抑甚至逆转腹膜纤维化进程。前期研究证实扶肾颗粒可通过调控TGF-β1等EMT相关活性物质阻抑腹膜纤维化进展。本课题系既往国家自然基金项目的纵深研究，围绕"通过调控腹膜间皮细胞EMT进程，可有效延缓甚至逆转腹膜纤维化进程，其作用机制与调控TGF-β1为核心的EMT信号网络有关"的科学假说，采用在体与离体实验，创新性使用慢性肾功能衰竭-腹膜纤维化复合动物模型、细胞3D模型等，结合病理学、分子生物学技术，探讨扶肾颗粒干预间皮细胞EMT相关信号串话关键节点的有效性，深入阐释扶肾颗粒对长程腹膜透析腹膜纤维化干预机制。同时，筛选优势药物组合，建立药物指纹图谱，初步分析有效成分，开展前瞻性药化研究，为后续多学科交叉研究奠定基础。

本课题是我们在既往完成的国家自然科学基金资助项目“基于Smurf2串话TGF-β/Smads通路探讨扶肾方防止腹膜间皮细胞EMT的研究”（项目编号81303092）、以及国家中医药管理局2008 年度中医药行业科研专项项目“中医药提高腹膜透析患者生存质量的关键技术研究”（项目编号No200807047）的基础上的进一步深化研究。.前期研究已经从临床观察与基础研究层面证实扶肾颗粒对于提高腹膜透析患者生存质量及减轻腹膜纤维化、改善透析效能的有效性。本实验通过网络药理学对扶肾颗粒进行药物有效成分分析及作用通路、作用靶点预测，通过质谱信息分析鉴定，扶肾颗粒（扶肾方）44种化学成分均可能被吸收，靶标预测所得132条作用通路，TGF-β信号通路即为与纤维化相关通路的其中之一。通过构建尿毒症腹膜透析复合模型所进行的动物在体实验、腹膜细胞原代培养进行离体实验并构建细胞3D模型，以期更准确地构建靶组织模型等技术进行观察及测量，利用组织学、分子生物学、病理学、免疫学等多领域先进检测方法研究显示，扶肾颗粒全方组及各拆方组相较于模型组，对慢性肾衰大鼠肾功能具有一定的改善作用；可一定程度上延缓腹膜组织EMT标志物E-Cadherin表达的降低并上调α-SMA表达；对高糖腹透液介导、时间依赖的腹膜结构的变化，扶肾颗粒及其各拆方组能够在一定程度上延缓其病理结构的进展，其作用机制可能与其干预了腹膜组织USP4、JNK及CSL蛋白及基因的表达有关。而在离体细胞学实验中，扶肾颗粒全方及拆方含药血清可不同程度减轻4.25%高糖腹透液对RPMCs的损伤；扶肾颗粒含药血清抑制EMT的机制可能与下调CSL基因与蛋白表达、下调P-JNK蛋白表达有关，并且全方组在整体综合表现可以见到强于各拆方组的优势。同时证明在RPMCs的EMT进程中，存在TGF-β/Smad与PI3K/AKT、MAPK、Notch信号通路活化情况。实验整体证实了扶肾颗粒通过调控TGF-β1为核心的EMT信号网络，有效延缓腹膜间皮细胞EMT进程，甚至逆转腹膜纤维化，为后续前瞻性研究及进一步临床转化提供了基础。