整合素连接激酶（ILK）促进胶质瘤侵袭生长的分子机制

本课题组既往研究表明整合素连接激酶(ILK)在胶质瘤中表达升高并与预后显著性负相关。在此基础上，建立ILK稳定高表达和表达持续下调的胶质瘤细胞系，通过划痕实验、transwell及Matrigel三维立体培养分析ILK对胶质瘤侵袭生长的影响，进一步通过体外和体内实验探讨ILK影响胶质瘤侵袭性的分子机制。采用RT-PCR、免疫印迹法、凝胶酶谱法、免疫组化法明确ILK可调控与肿瘤侵袭密切相关的NF-κB靶基因转录和表达后，通过体内外实验，采用脂质体瞬时共转染、双荧光素酶报告基因测试系统、免疫印迹和免疫荧光染色等方法研究ILK能否激活IKK/IκB/NF-κB信号传导通路从而调控与肿瘤侵袭密切相关的NF-κB靶基因；进一步论证ILK激活NF-κB信号通路是否通过AKT介导。希冀深入揭示ILK在胶质瘤侵袭生长的恶性生物学行为中所起的作用及其机制,为ILK成为胶质瘤治疗靶点的可行性提供理论依据。

本课题组既往研究表明整合素连接激酶(ILK)在胶质瘤中表达升高并与预后显著性负相关，但ILK在胶质瘤恶性生长的生物学行为中所起的作用及其机制尚不明确。针对此关键问题，本课题从三个方面展开研究：（1）明确ILK表达上调促进人胶质瘤细胞侵袭，而且寻找到其上游调控分子microRNA-X（尚未发表，不宜公开），microRNA-X在胶质瘤组织中表达降低，对ILK直接靶向调控的能力下降，AKT信号传导通路激活，进而导致胶质瘤细胞侵袭能力显著增强。（2）本研究中免疫组化结果胶质瘤中ILK蛋白过度表达与NF-κB蛋白激活呈显著性相关，提示ILK参与激活转录因子NF-κB，但其中间调控机制尚不清楚。深入研究发现IKK家族重要成员IKBKE在胶质瘤中过度表达，并且可通过激活IKK/IκB/NF-κB信号通路显著增强胶质瘤细胞的抗凋亡能力。（3）本课题组在胶质瘤细胞中过表达ILK后，通过microRNA芯片分析发现microRNA-Y下降显著（尚未发表，不宜公开），实验结果表明胶质瘤细胞中ILK可能的下游调控因子microRNA-Y表达下调后，对IKBKE直接靶向调控的能力下降，激活转录因子NF-κB，胶质瘤细胞抗凋亡能力显著增强。总之，本项目较系统地阐明了ILK 在胶质瘤恶性生长的生物学行为及上下游信号调控的分子机制,为ILK 成为胶质瘤治疗靶点的可行性提供重要的理论依据。