基于“天癸竭”理论探讨LOH发病的“氧化应激-自噬失调”机制及雄蚕益肾方干预研究

Late-onset Hypogonadism (LOH) is typically accompanied with reduced serum level of testosterone, which usually begins of Tian Guei failure is about “wu ba” to “ba ba”. With men aging, the functional decline of leydig cell is the core of the disease pathogenesis. The accumulation of Reactive oxygen species (ROS) and autophagy decline, both of which induced cell senescence of leydig cell may explain for occurrence of LOH. Based on the correlation of testosterone and Tian Guei, we suggested that the age-related accumulation of ROS and mitophagy decline in leydig cell, is the micro foundation of Tian Guei failure. We carried out the following researches around the functional decline of leydig cell, which with the key point of ROS and autophagy. ①The hypothesis validation of age-related accumulation of ROS and mitophagy decline in leydig cell, is the micro foundation of Tian Guei failure.②The molecular mechanism of Xiong can yi shen formula, which regulated testosterone biosynthesis in leydig cell. ③The molecular mechanism of Xiong can yi shen formula, which treatment LOH by regulated ROS and mitophagy in leydig cell. The study results will provide empirical evidence to support the theory of Tian Guei failure, and lay a substantial foundation for LOH treatment, which use the method of reinforcing kidney recipe.

迟发性性腺功能减退症(LOH)病发于男子“五八”-“八八”天癸渐竭之时，睾酮水平下降是主要原因，与睾丸间质细胞(Leydig cell)氧化应激、自噬下降诱导的细胞衰老有关，因而Leydig细胞睾酮合成功能随增龄衰退是关键研究因素。基于“天癸-睾酮”可能相关性，我们提出“天癸渐竭”的微观基础是增龄相关的Leydig细胞“ROS蓄积-线粒体自噬失调”。围绕Leydig细胞睾酮合成功能衰退，以“氧化应激-自噬”为切入点，开展以下研究：①Leydig细胞“ROS蓄积-线粒体自噬失调”是“天癸渐竭”的微观基础假说验证；②“天癸渐竭”理论指导的雄蚕益肾方调控Leydig细胞睾酮合成分子机制研究；③雄蚕益肾方调控Leydig细胞“ROS-线粒体自噬”干预LOH分子机制研究。本项目假说的验证，将从全新角度阐释和丰富“天癸竭”理论内涵，并为临床确立“补肾、益天癸”的LOH中医药治疗策略提供实验依据。

迟发性性腺功能减退症(LOH)病发于男子“五八”-“八八”天癸渐竭之时，睾酮水平下降是主要原因，与睾丸间质细胞(Leydig cell)氧化应激、自噬下降诱导的细胞衰老有关，因而Leydig细胞睾酮合成功能随增龄衰退是关键研究因素。本项目围绕Leydig细胞睾酮合成功能衰退，以“氧化应激-自噬”为切入点，开展以下研究：.①流行病学调查长沙地区城镇居民LOH发生率较高（临床患病率10.85%），年龄、整体健康状况及生活方式均是影响LOH的重要因素。②临床研究证实雄蚕益肾方联合小剂量睾酮补充治疗LOH疗效确切。③离体实验通过复制Leydig细胞（TM3细胞）氧化损伤模型（条件：AAPH浓度6mM，作用时间24h），雄蚕益肾方含药血浆干预后，能显著增加Leydig细胞活力，减少AAPH诱导下ROS产生，降低mtDNA拷贝数，增加线粒体自噬，但对Leydig细胞线粒体膜电位无明显影响。④在体实验选择18月龄雄性SD大鼠视为LOH模型，雄蚕益肾方干预后，检测激素水平、氧化应激、线粒体自噬、睾酮合成酶，以及病理、电镜等相关指标，研究证实：a. LOH大鼠睾丸组织线粒体自噬水平下降，雄蚕益肾方干预后线粒体自噬水平增加，可能与提高睾丸组织PINK1、Parkin蛋白表达，降低p62蛋白表达，影响LCs超微结构等有关；b. 雄蚕益肾方能提升LOH大鼠T水平、降低悬尾不动时间、一定程度影响睾丸组织形态和超微结构，可能与提高睾丸组织抗氧化能力有关；c. 雄蚕益肾方能上调LOH大鼠睾丸组织胆固醇转运蛋白（StAR、TSPO）、睾酮合成酶（CYP11A1、HSD3B7、HSD17B4）以及上游转录因子SF-1表达水平，可能是其干预LOH的机制之一。d. 另外雄蚕益肾方还能增加肝郁肾虚ED大鼠的交配次数，活化NO/cGMP通路，上调阴茎组织中eNOS、cGMP表达；以及调节性腺轴和提高NR5A1表达。.基于临床、离体、在体实验证实：Leydig细胞氧化应激、自噬失调可能是LOH发病原因之一，雄蚕益肾方能用于LOH治疗，其机制涉及氧化应激、自噬、睾酮合成酶等多途径、多靶点，为临床雄蚕益肾方应用提供了实验基础。