基于“HGF是乙癸同源物质基础”假说的“肾肝同治”法干预男性更年期综合征机制研究

The basic pathogenesis of male climacteric syndrome is reduce of T level because of testis leydig cell aging; hepatocyte growth factor(HGF) is a kind of cell factor which source of liver,can Promote leydig cell testosterone synthesis.The project according to "Shen Xu Gan Yu" of male climacteric syndrome, as the breakthrough point to "Yi-Guei-Tong-Yuan",intervene in "Shen-Gan-Tong-Zhi",around this Problem about HGF secrete,leydig cell apoptosis,the activity of testosterone synthetize enzyme,using animal model,hepatic nonparenchymal cells-leydig cell cocultivation, cell transfection methods,develop some reserch: ①Proving the hypothesis of HGF is material base of Yi-Guei-Tong-Yuan; ②The effect evaluate of Shen-Gan-Tong-Zhi to leydig cell Testosterone generation and intervene male climacteric syndrome；The target of shen-gan-tong-zhi intervene male climacteric syndrome.By the research HGF secretion,leydig cell apoptosis,the activity of testosterone synthetize enzyme will show the The Experimental Base of "Shen-Gan-Tong-Zhi" to male climacteric syndrome,and A abundant the Scientific Connotation about "Yi-Guei-Tong-Yuan".

睾丸间质细胞衰老引起的睾酮（T）水平下降是男性更年期综合征主要发病基础；肝细胞生长因子（HGF）是肝源性细胞因子，能促进睾丸间质细胞T合成。本项目根据男性更年期综合征中医"肾虚肝郁"病机特点，以"乙癸同源"理论为切入点，采用"肾肝同治"法进行干预，围绕HGF分泌、睾丸间质细胞凋亡、T合成相关酶活性等问题，应用动物模型、肝非实质细胞-睾丸间质细胞共培养、细胞转染等方法，开展以下研究：①"HGF是乙癸同源物质基础"假说验证；②肾肝同治法促间质细胞T合成、干预男性更年期综合征的分子机制；③肾肝同治法干预男性更年期综合征的作用靶点。本项目通过深入研究肾肝同治法促HGF分泌、抑制间质细胞凋亡、活化T合成相关酶等机制，为临床运用肾肝同治法治疗男性更年期综合征提供实验依据，同时"HGF是乙癸同源物质基础"假说的提出与验证，将进一步丰富乙癸同源理论的科学内涵。

本研究分为四部分进行，分别采用了ELISA法、HE染色法、电镜观察法、RT-PCR法和Western-blot法进行研究。第一部分，构建睾丸间质细胞-肝脏非实质细胞共培养体系，模拟“乙癸同源”细胞微环境，以雄蚕益肾疏肝方含药血浆干预，观察上清液中HGF、T含量，细胞中HGF、c-Met、caspase-3 表达等指标。表明：睾丸间质细胞-肝脏非实质细胞共培养能显著增加睾丸间质细胞T分泌，可能与HGF/c-Met信号通路介导有关。第二部分，以中医理论“房劳过度伤肾”、“郁久伤肝”为指导，采用“退役种鼠（40周龄）+复合情志刺激+孤养”方法，建立“肾虚肝郁证”男性更年期综合征动物模型，与正常组比较，以血清T、悬尾实验、睾丸间质细胞超微结构、睾酮合成相关酶以及Caspase-3表达为指标。表明：该方法复制“肾虚肝郁证”男性更年期综合征模型切实可行。第三部分，雄蚕益肾疏肝方干预男性更年期综合征大鼠，与正常组、模型组、金匮组、逍遥组、丙酸睾酮组比较，以血清T、HGF，睾丸组织睾酮合成酶（StAR、P450scc、3β-HSD）、HGF/c-Met、caspase-3表达，睾丸组织形态学、超微结构等为指标。表明：雄蚕益肾疏肝方能显著提升男性更年期综合征大鼠血清T水平，可能与以下机制有关：上调睾酮合成酶（StAR、P450scc、3β-HSD）表达、上调HGF/c-Met表达、下调caspase-3 表达，抑制睾丸间质细胞凋亡。第四部分，本项目还开展了系列流行病学拓展研究，表明：长沙地区城镇居民男性更年期综合征发生率较高（临床患病率为10.85%），血清TT、SHBG、FT、Bio-T、FTI水平随增龄均呈现明显梯度性变化，其中SHBG水平逐渐增高，TT、FT、Bio-T、FTI水平则逐渐降低。与SG呈负相关，与血脂、UA没有相关性。.本项目在国内核心期刊已发表论文4篇，会议论文1篇，全国性会议报告1次，参加国家级学术会议5次，省级学术会议1次，培养硕士研究生1名，博士研究生1名。