RNA解旋酶DDX25促进登革病毒感染的作用及机制研究

Host cell RNA helicase play an important role in RNA viral infection. Our preliminary experiment suggested, 40 members of RNA helicese with DEAD-box (DDX) domain play different roles during dengue virus infection. DDX25 was found to significantly promote the dengue virus infection of host cell. Silencing the DDX25 via RNAi, the virus infection level dramatically induced, while the IFN-βpromoter activity increased. Base on the data, we will further characterize the detail function of DDX25 during DENV infection. Cell-based viral infection, immunofluorescence, quantitative PCR, reporter assay, and immunoprecipitation will be used to study the mechanisms of DDX25 on promoting viral infection, and its impact on virus-induced type I interferon response. This study will be the first time to reveal the novel role of DDX25 durng viral infection, and will provide a new target for the developing of anti-viral drugs against RNA virus, as well as a new evidence for the role of DDX25 in immune modulation.

宿主细胞RNA解旋酶在RNA病毒感染细胞过程中发挥重要作用。我们前期实验发现40个含有DEAD-box（DDX）结构域的RNA解旋酶家族成员在登革病毒感染宿主细胞过程中的作用不尽相同。其中DDX25显著促进登革病毒感染宿主细胞。RNAi沉默DDX25后，细胞内登革病毒感染水平显著降低，而IFN-β的启动子活性显著升高，提示DDX25是登革病毒感染细胞所需要的宿主因子，并可能通过影响干扰素途径发挥作用。本项目将在前期工作基础上，采用细胞病毒感染、免疫荧光、定量PCR、报告基因实验、免疫沉淀等多种技术手段，深入研究DDX25促进登革病毒感染的分子机制，了解其对病毒诱导的I型干扰素反应的影响，并解释其作用机制。本项目将首次揭示Dead-box家族成员DDX25促进登革病毒感染的全新功能，为开发抗RNA病毒药物提供新的靶点，同时为DDX家族成员参与免疫调控提供新的证据。

登革病毒是由蚊子传播的病毒，包含DENV1-4四种不同的血清型，对人类健康造成严重危害。由于现今仍没有同时针对四种血清型的有效四价疫苗，因此迫切需要找到控制DENV病毒复制及传播的替代方法。DDX25作为宿主细胞RNA成员解旋酶，在RNA病毒感染中起很重要的作用。DDX25与病毒关系的分子机制尚不明确。通过本项目的研究发现，DDX25抑制I型干扰素和炎症因子的表达，体内和体外结果一致。在VSV和DENV病毒感染实验中，与对照组野生型小鼠相比，DDX25转基因小鼠组病毒感染量显著性增高，且IFN受到显著抑制。进一步研究表明，DDX25通过抑制IRF3的磷酸化和二聚化进而抑制IFNβ的产生，同时，DDX25通过诱导IKBα从而抑制NFκB入核，进而发挥促进病毒复制的作用。此研究首次揭示DDX25具有醋精病毒复制的新功能，为后续开发针对RNA病毒的药物提供新的靶标，并为DDX25在免疫调节中的作用提供新的佐证。