针刺联合亚低温对脑缺血再灌注大鼠脑组织miRNAs表达谱的影响及机制研究

Cerebral ischemia reperfusion injury ( CIRI )is that brain cell injury induced by cerebral ischemia, restoration of blood after reperfusion, the ischemic injury but further aggravate the phenomenon. Acupuncture significantly effect on the CIRI, mild hypothermia in the treatment of CIRI also is one of the most important neuroprotective method, has been used for the treatment of ischemic cerebrovascular disease. MiRNAs is a ubiquitous molecular fine-tuning of gene expression, because the miRNAs is highly conservative, and tissue specific timing system evolution between species in the expression, the use of micro array chip technology in the detection of acupuncture combined with mild hypothermia brain treatment of tissue CIRI rats miRNAs spectrum, find out the different expression of miRNA, further screening of miRNAs associated with CIRI damage, accurate prediction of acupuncture combined with mild hypothermia in the treatment of CIRI may be therapeutic targets, to explore its possible mechanism, to maximize the protection of brain function. To provide experimental basis for clinical acupuncture treatment of cerebral vascular disease, rich meridians - organs meaning theory.

脑缺血再灌注损伤（CIRI）是指脑缺血致脑细胞损伤，恢复血液再灌注后，其缺血性损伤反而进一步加重的现象。针刺对CIRI疗效显著，亚低温已广泛应用于该病临床治疗，为最重要的神经保护方法之一。其机制为再灌注过程中多基因参与，启动一系列病理生理反应，导致神经元损伤加重。miRNAs是一种广泛存在的对基因表达进行微调的分子，具有系统进化上的高度保守性、时序性和组织特异性。故本课题拟采用微阵列芯片技术检测针刺联合亚低温治疗CIRI大鼠后脑组织miRNAs的表达谱变化，找出差异表达的miRNA，进一步筛选与CIRI损伤相关的miRNAs,准确预测针刺联合亚低温治疗CIRI的可能治疗靶点，探讨其可能的效应机制，最大限度地保护脑的生理功能。为针刺临床治疗脑血管疾病提供一定实验依据，丰富经脉-脏腑相关理论的内涵。

脑缺血再灌注损伤（CIRI）是指脑缺血致脑细胞损伤，恢复血液再灌注后，其缺血性损伤反而进一步加重的现象，是脑血管疾病发病的主要部分，且其机制为再灌注过程中多基因参与，启动一系列病理生理反应，导致神经元损伤加重。临床验证，针刺对CIRI疗效显著，亚低温治疗亦为临床使用广泛的干预手段，为最重要的神经保护方法之一。miRNAs是一种广泛存在的对基因表达进行微调的分子，具有系统进化上的高度保守性、时序性和组织特异性。故本课题采用微阵列芯片技术检测针刺联合亚低温治疗CIRI大鼠后脑组织miRNAs的表达谱变化，论证其与缺血再灌注损伤的关联性及针刺联合亚低温的干预效应。. 本课题采用Longa方法并加以改良制作局灶性脑缺血再灌注损伤模型，针刺（人中穴、百会穴、大椎穴）联合亚低温进行干预，参照Zea Longa法行神经功能的缺损评分，TTC法测定大鼠脑梗死面积，应用microRNA技术检测脑缺血组织miRNAs的异常表达情况，利用TargetScan等软件分析预测靶基因， RT-PCR验证差异表达的miRNAs。研究结果结论:(1)针刺联合亚低温疗法能降低缺血再灌注大鼠脑组织神经功能缺损评分和减少缺血再灌注大鼠脑组织梗死面积比;(2)针刺联合亚低温组差异表达的miRNA数目为23个，其功用涉及调节细胞增殖、细胞凋亡等;(3)差异表达的miRNAs涉及到MAPK、Jak-STAT等23条信号通路;(4)针刺联合亚低温促脑缺血再灌注损伤修复可能与miR-106-5p、miR-136-3p、miR-204-5p、miR-20a-5p、miR-22-5p、miR-34c-3p、miR-34c-5p有密切关系; (5)针刺联合亚低温对脑缺血再灌注损伤修复过程是多靶点、多通路的调控实现的，初步预测了针刺联合亚低温治疗CIRI的可能治疗靶点，探讨其可能的效应机制，为针刺临床治疗脑血管疾病提供一定实验依据。