GPRC6a/RFX6基因区域SNPs在前列腺癌发生发展中的生物机制研究

More than 60 independent susceptibility loci have been identified by genome-wide association studies (GWAS). However, the mechanistic roles of these SNPs remain poorly defined. In previously research we observe a significant association between the risk-associated T allele at rs339331(GPRC6a/RFX6) and increased RFX6 and GPRC6a mRNA levels in human prostate tumors, because osteocalcin are one of agonists of GPRC6a, then we found that osteocalcin did play a role in proliferation, migration and invasion of PCa. In order to assess the effects of genetic variations on GPRC6a, this project is proposed to apply Chip，3C, NOMe-Seq , hMedip/ Medip technology on PCa cells or PCa tissue . The roles of genetic variations in the development of PCa will be revealed through the analysis of transcription binding，chromosome comformation,nucleosome positioning and epigenetic modification. Clarifying the function of the GPRC6a variants and their link to ostocalcin regulation will allow a deeper understanding of the mechanisms underlying human cancer development.

前列腺癌有多个SNP变异被GWAS研究报道，然而对于它们的生物机制却十分缺乏了解。我们前期研究发现，当rs339331（GPRC6a/RFX6）碱基为"T"时，GPRC6a及RFX6的表达明显较为"A"时增高。骨钙素是GPRC6a的激动剂之一，病例分析发现骨钙素与前列腺癌的发展转移存在剂量效应。据此我们假设，GPRC6a/RFX6基因区域SNPs可能影响GPRC6a等基因的功能，从而影响前列腺癌的发生发展，且可能参与骨钙素-leydig细胞-雄激素-前列腺癌调控。我们拟通过Chip，3C，NOMe-Seq, hMedip/Medip等技术对该区域DNA立体构象、转录因子结合能力、核小体定位及表观遗传学修饰等进行检测，探索此区域SNP的功能，然后进行体外（细胞）及体内（基因打靶小鼠）功能验证，最终阐明GPRC6a/RFX6基因区域SNPs在前列腺癌发生发展中的生物机制。

GPRC6a基因第二外显子的错义突变单核苷酸多态位点（single mucleotide polymorphisms, SNP）rs2274911（Pro91Ser ，G>A）与前列腺癌的发生发展相关。GPRC6a是骨钙素、雄激素等激素的配体，参与多项细胞生命活动，然而我们对于其Pro91Ser SNP位点的功能研究非常欠缺。本研究通过防城港地区男性队列（Fangchenggang Area Male Health and Examination Survey，FAMHES）数据，探索GPRC6a Pro91Ser位点与血清性激素、胰岛素等生化指标的相关性，并且通过体外细胞实验进一步探索GPRC6a Pro91Ser位点参与细胞信号通路的机制。研究结果提示，GPRC6a Pro91Ser等位基因GG/GA/AA的分布，影响血清E2及PSA水平，随着rs2274911 SNP位点A等位基因的频率增加，血清E2、PSA水平增加。在非肥胖人群中，rs2274911的A等位基因频率，对E2的血清水平有显著的相关性。细胞体外实验提示，过表达突变型GPRC6a Pro91Ser 的293T细胞，生长速度、迁徙能力显著较过表达GPRC6a 野生型（WT，wild type）的 293T细胞增强，其促进细胞增殖和侵袭可能是通过AKT磷酸化细胞信号通路进行。GPRC6a Pro91Ser对于前列腺癌PC-3细胞的侵袭增殖能力的影响实验正在进行中。结论：GPRC6a Pro91Ser位点等位基因GG/GA/AA的分布，影响男性人群血清E2及PSA水平。GPRC6a Pro91Ser突变，促进了细胞增殖侵袭能力的增加。