源于肠道吸收网络的淫羊藿总黄酮仿生酶解口服给药系统的研究

基于以往对肠道吸收网络影响中药活性成分吸收代谢的深入研究，发现某些黄酮苷需要在肠道内水解为单糖苷或苷元，进而吸收发挥药理作用。但是由于个体肠道水解黄酮苷的粘膜酶和肠道菌酶的相对不足和个体差异，显著限制和影响了药效的稳定发挥。针对上述问题，本项目以淫羊藿总黄酮为研究对象，筛选高效安全的淫羊藿二糖苷、三糖苷水解酶，构建药物、酶、功能辅料三位一体的适宜于淫羊藿总黄酮肠道内"实时酶解"、"实时吸收"的仿生口服给药系统，在体内通过外加酶将淫羊藿总黄酮中的多糖苷水解，增加淫羊藿总黄酮的口服生物利用度，以提高药效，并降低个体差异造成的药效波动。本研究的目的在于通过体内外酶解相关性、酶缺乏状态下体内外吸收模型的监测、分子水平粘膜酶的表达测定、及生物利用度、药效学等研究方法，优化给药系统的设计，揭示淫羊藿总黄酮仿生口服给药系统的有效性和科学性，为类似黄酮苷类药物的口服吸收提供新的研究思路与方法。

淫羊藿黄酮（EF）具有较好的抗骨质疏松活性，但体内吸收较差，需要在肠道内水解为次级苷或苷元，进而吸收发挥药理作用。本研究采用体外离体肠粘膜酶和肠菌酶孵育，体内大鼠肠灌流模型比较了EF在健康大鼠与骨质疏松模型下的肠道吸收代谢，发现在病理状态下，EF水解速率显著变慢。通过外加水解酶，构建EF、酶、功能辅料三位一体的仿生口服给药系统，促进总黄酮的水解转化。项目模拟体内环境，筛选出蜗牛酶为水解EF的最佳外源酶并确定最佳酶解条件为：酶与底物质量比为1:1，底物浓度为10 mg/mL；；MTT实验证实酶解产物对成骨细胞的增殖作用强于相应的原型苷。成功构建淫羊藿总黄酮仿生口服给药系统。采用单因素和响应面法实验筛选制备肠溶普通胶囊（OEC）所需的填充剂、崩解剂、润湿剂及制粒条件，筛选制备肠溶黏附胶囊(AEC)所需的黏膜黏附剂。得到OEC的最优处方为：EF100 mg、蜗牛酶68 mg、α-乳糖65 mg、低取代羟丙纤维素11.7 mg。AEC的最优处方为：EF100 mg、蜗牛酶64 mg、卡波姆36 mg、α-乳糖34 mg，制备胶囊。结果显示OEC中EF在45min时累积释放度为86.65%，1h时基本释放完全，主要黄酮苷在4h时基本酶解完全，酶解产物量在3h时达到最高。AEC的粘附力为45.40 g/cm2，12h时EF累积释放度为88.88%，2h释放量最大，在12h时基本酶解完全。采用自定义权重系数法整合各黄酮生物利用度，对健康大鼠，各组黄酮生物利用度未见明显差异；对骨质疏松大鼠，OEC组淫羊藿总黄酮整合生物利用度提高了近20%，其他各药动学参数未见明显差异；而AEC淫羊藿总黄酮整合生物利用度提高了近1倍、体内驻留时间延长3.5 h、半衰期延长2.3 h、达峰浓度提高2.1 mg/L。药效学实验表明，与模型组、EF组、市售制剂仙林骨葆和OEC组比较，AEC组更能显著升高卵巢摘除骨质疏松大鼠的骨密度、骨Ca骨P和血中雌二醇，降低血中Ca、P、ALP、甲状旁腺激素和骨钙素；更能降低尿中脱氧吡啶酚、钙/肌酐、磷/肌酐和羟脯氨酸/肌酐等指标。综上，EF、OEC和AEC均能改善大鼠骨质疏松，但AEC效果更优，证明了本项目所构建的淫羊藿总黄酮仿生酶解口服给药系统的科学性和有效性，为其它黄酮类成分的充分吸收利用提供了新的研究思路与研究方法。