内源性多肽ZYX36-58抑制卵巢癌侵袭转移的作用与机制研究

ZYX36-58 is an endogengous peptide identified by mass spectrometry. Its aboudance is high in ovarian cancer adjacent tissue and low in High Grade Ovarian adenocarcinoma as well as the highly metastatic ovarian cancer cell line, HO8910PM. Our previous study indicated that ZYX36-58 can inhibit cell invasion and migration in vitro and in vivo. Besides, we found NEDD9 as a potential target of ZYX36-58 by pull down assay, which regulates cell invasion and migration through binding of focal adhesion kinase and SRC. Previous study indicated that a high level of NEDD9 expression is significantly correlated with advanced stage tumors and high grade carcinomas and NEDD9 may serve as a potential target of ovarian cancer. To further evaluate the possibility of ZYX36-58 as an ovarian cancer therapeutic target, we will further investigate the inhibit effect of ZYX36-58 on ovarian cancer cell invasion and migration in vitro and in vivo and explore the mechanism of ZYX36-58 function through NEDD9. So far there is no report of ZYX36-58, our study will is of certain novelty and will provide new clue for the therapeutic of ovarian cancer.

ZYX36-58是我们前期通过质谱筛选获得的、在正常组织中丰度较高、在高级别浆液性腺癌肿瘤组织与高转移卵巢癌细胞HO8910PM中丰度均极低的一条多肽，前期我们初步证实ZYX36-58具有抑制卵巢癌侵袭转移功能，利用pull down等实验发现ZYX36-58可能通过结合NEDD9发挥作用。既往文献提示NEDD9主要通过结合黏着斑激酶和SRC等调节细胞的侵袭迁移等，其表达水平与卵巢癌FIGO分期呈正相关，是卵巢癌极具潜力的治疗靶标。因此，为论证ZYX36-58作为卵巢癌治疗潜在分子的可行性，本研究拟从细胞及动物模型水平进一步评估ZYX36-58对人卵巢癌细胞侵袭转移的作用，并通过Rescue策略论证ZYX36-58通过NEDD9介导的作用机制。目前尚无ZYX36-58的报道，本研究将揭示ZYX36-58抑制卵巢癌侵袭迁移的作用与机制，为卵巢癌治疗和药物研发提供新线索。

卵巢癌是死亡率最高的妇科恶性肿瘤，尽管在过去10年间，卵巢癌的靶向治疗和免疫治疗取得了极大的进步，然后2018年发表的数据表明卵巢癌的总体生存率并没有显著改善。进一步探索卵巢癌的治疗靶标，寻找效率高、毒副作用低的治疗药物仍然是卵巢癌临床研究的关键问题。多肽是一种介于小分子和蛋白质之间的化合物，由于具有适应症广，安全性高等特点，已经广泛应用于临床。近年来，随着质谱技术及多肽合成技术的发展，内源性多肽类药物的研发成为一个新的研究方向。我们利用质谱技术筛选了在卵巢癌患者血清及正常体检对照血清中差异表达的多肽谱及卵巢癌组织和正常卵巢组织中的差异表达多肽谱，通过实验验证发现其中在卵巢癌患者血清中显著降低的多肽ZYX36-58（来源于ZYX）可以显著抑制卵巢癌细胞的侵袭、转移，促进其凋亡，质谱检测发现22个蛋白可以特异性的在生物素标记的ZYX36-58下拉蛋白洗脱液中检测到，进一步通过WB验证了其中丰度最高的4个蛋白（EEF1A2、YBX1、PCLO、TSP1）及ZYX36-58前体蛋白ZYX在ZYX36-58洗脱液中的富集情况，发现只有凝血酶敏感蛋白TSP1可以特异性的在ZYX36-58洗脱液中检测到，同时TSP1蛋白在ZYX36-58处理的SKOV3细胞中显著升高，而TSP1在卵巢癌中作为一个抑癌基因，高表达和卵巢癌的高生存率显著相关，其除了可以调控肿瘤的血管发生及细胞凋亡外，还可以调节巨噬细胞在肿瘤中的招募及炎症因子的产生等，而我们发现IL1A在ZYX36-58处理的卵巢癌细胞中显著升高。此外在卵巢癌组织中显著降低的多肽P1DS（来源于S38AA）可以显著抑制卵巢癌细胞的增殖、侵袭和转移，促进其凋亡，多肽pull down后质谱鉴定发现有38个蛋白特异性的生物素标记的P1DS洗脱液中检测到，其中有10个蛋白被报道和细胞迁移相关，可以作为下一步研究的对象。总之，这些结果将为探索内源性多肽在肿瘤中的治疗作用提供新靶标、新思路。