黑果枸杞花色苷功能组分及其生物效价研究

花色苷类化合物是一类生物活性很强的植物次生代谢产物，具有抗氧化、抗衰老、防治心脑血管硬化等多种功效，逐渐成为新药物和保健品的主要成分来源。盐生植物黑果枸杞果实富含花色苷类化合物，课题组在前期研究中已证实黑果枸杞花色苷类提取物具有良好的抗氧化和降血脂活性，经HPLC-MS方法鉴定4种花色苷类成分，发现矮牵牛苷化合物为主要成分，同时发现一种尚未报道的新花色苷类化合物HG1，其结构显著区别于其余3种。本项目拟在此基础上，进一步研究黑果枸杞花色苷类化合物抗氧化、防治动脉粥样硬化功能组分及其生物效价，一方面采用高效液相色谱法和现代光谱学方法解析有效成分的化学结构，另一方面探讨黑果枸杞花色苷抗氧化活性与抗动脉粥样硬化功效之间的关系，揭示黑果枸杞在中华民族传统医药中防治动脉粥样硬化等心血管疾病的物质基础和作用机制，为荒漠盐生植物资源利用提供依据。

本研究以黑果枸杞为研究对象，对其果实花色苷类化合物进行分离鉴定，从体外细胞水平和整体动物水平及分子水平评价黑果枸杞花色苷（ALR）抗动脉粥样硬化活性，探讨其抗氧化、降血脂与抗动脉粥样硬化之间的关系及活性物质基础。. 首先，利用大孔树脂建立最优提取分离纯化方法，黑果枸杞用10倍量5%的醋酸水溶液冷浸48小时或超声提取30分钟；通过大孔树脂用水、30%，50%，70%，95%乙醇洗脱；利用DPPH•自由基的清除能力实验证实由70%乙醇洗脱获得的主要花色苷成分具较好抗氧化活性。利用制备型HPLC获得两个化合物，根据核磁和质谱的结果确定为peonidin3-O-[6-O-(4-O-E-p-coum-aroyl-O-α- rhamnopyranosyl)-β-glucopyranoside]-5-O-β-glucopyranoside和petunidin- (ciscoumaryl)-rutinoside-5-O-glucoside。. 黑果枸杞花色苷对高脂小鼠血脂和抗氧化能力以及动脉粥样硬化影响实验表明，花色苷能显著降低小鼠血清TC、TG、LDL-C和AI水平（P<0.05），升高HDL-C水平；肝脏T-AOC、GSH-PX、LPL显著升高（P<0.05），MDA极显著下降（P<0.01）；花色苷还能降低主动脉斑块面积 (P<0.05)。可见，黑果枸杞花色苷具有干预小鼠动脉粥样硬化形成，降低血脂水平，提高小鼠体内抗氧化能力。对动脉粥样硬化小鼠组织中相关基因表达研究表明，ALR能显著降低组织中ICAM-1和VCAM-1基因表达（P<0.05~P<0.01），增加PPARα和PPARγ基因的表达量（P<0.05~P<0.01）。结论：黑果枸杞花色苷可以干预小鼠AS形成，而对动脉粥样硬化相关4种基因的表达调控，是其抗AS的作用机制之一。. 对ox-LDL损伤血管内皮细胞保护实验表明，利用人脐静脉血管内皮细胞，建立ox-LDL氧化损伤模型，中高浓度的花色苷可以有效的抑制ox-LDL对血管内皮细胞的损伤，减缓被损伤细胞的G0/G1比率及凋亡率，增高SPR、G2/M 比率；同时提高细胞中SOD、POD、GSH-Px酶活性，降低MDA含量。由此可见，黑果枸杞花色苷对ox-LDL引发的人脐静脉内皮细胞损伤具有保护作用，其机制与抗氧化有关联。