核糖体蛋白L22参与调控人肺动脉阻力血管平滑肌细胞异常增殖的分子机制研究

肺动脉阻力血管平滑肌细胞（PASMCs）异常增殖是肺动脉高压发病最重要的病理基础，探讨细胞异常增殖调控途径是肺动脉高压发病机理研究的重点之一。核糖体蛋白对细胞增殖分化的重要调控功能是目前研究的热点。本课题组在筛选人PASMCs增殖相关蛋白时发现，细胞在内皮素-1刺激增殖时核糖体蛋白L22（RPL22）表达上调；抑制RPL22表达后，一些细胞周期、增殖相关基因如Bcl-XL、CCND1和PI3K等表达下调，推测RPL22是人PASMCs中重要的信号调控分子。本项目拟在以往工作基础上，用Western blot、real-time PCR和基因芯片的方法分析人PASMCs在抑制和高表达RPL22基因后，PI3K-AKT Signaling信号通路的激活和相关信号分子表达变化，并分析基因对细胞周期、细胞凋亡的影响；本项目研究对于阐明肺动脉高压的发病机理、筛选其治疗的新靶标分子等具有重要意义。

肺高压（PH）是临床上常见的一组严重肺循环疾病，其血流动力学的特点为肺动脉压力持续性升高。由于肺动脉压力的持续性升高，PH患者右心后负荷持续升高，常并发右心肥大，导致右心衰竭或恶性心律失常，甚至猝死，严重威胁患者的生命，死亡率高，已成为目前威胁人类生命的严重疾病之一。PH的发病率和死亡率高，但其发病机制至今仍未明确，临床上缺乏理想的治疗药物。. 核糖体蛋白 L22（RPL22）是细胞核糖体蛋白家族中的重要成员之一，是真核细胞核糖体60S亚单位的组成部分。本课题组既往运用蛋白组学研究Iptakalim抑制ET-1刺激的肺动脉平滑肌细胞增殖时，发现RPL22的异常表达，提示RPL22可能参与了肺动脉平滑肌细胞的异常增殖。本研究通过组织贴块法建立人肺动脉平滑肌细胞模型，并通过差异性贴壁法纯化细胞，用细胞免疫化学方法鉴定人肺动脉平滑肌细胞。培养肺动脉平滑肌细胞，将siRNA干涉片段（siRNA-RPL22）转染人肺动脉平滑肌细胞使RPL22低表达，腺病毒包装的RPL22质粒感染人肺动脉平滑肌细胞使RPL22高表达。用Realtime-PCR、Western blot方法分别检测RPL22 mRNA 和RPL22蛋白的表达，验证RPL22低表达和RPL22高表达的干涉效果；CCK-8、PCNA、FACScan流式术等方法检测细胞增殖和细胞周期，研究RPL22对人肺动脉平滑肌细胞异常增殖的影响和潜在的机制。实验结果提示，低表达RPL22后，肺动脉平滑肌细胞的RPL22表达得到有效的抑制，ET-1诱导的肺动脉平滑肌细胞增殖受到抑制；高表达RPL22后，肺动脉平滑肌细胞增殖明显，但与ET-1刺激条件下无显著性差异。同时，细胞周期蛋白CyclinD1（CCND1）的表达在抑制RPL22表达后显著降低，而在高表达RPL22时则显著升高，提示RPL22可通过影响CCND1的合成而影响肺动脉平滑肌细胞的增殖。