CD8+细胞毒性T细胞诱导神经膜细胞凋亡致糖尿病周围神经病变的作用与机制

Diabetic peripheral neuropathy （DPN） is one of the most important causes for the mortality and mobility of the patients with diabetes. We have confirmed the infiltration of CD8+T cell in peripheral nerves for patients with DPN, and found that high glucose can stimulate the expression of chemokines in the Schwann cells（SCs） and the corresponding receptor in CD8+T cells. It was speculated that cytotoxic T cell(CTL) induced by specific antigens from SCs in peripheral nerves may be responsible for the apoptosis of SCs. This study intend to figure out the correlation between the infiltration of CTL and the condition or prognosis for the patients by flow cytometry and immunohistochemistry; to investigate the activation and chemo attractant of CD8+T cells by SCs from patients with DPN and the CTL-induced apoptosis of SCs in vitro co-culture system; to explore the role and mechanism for the high glucose-induced production of specific antigen in SCs; to detect the effects of immune tolerance treatment for DPN in animal models. Exploration for the pathogenesis of DPN in the way of oxidative stress -induced immune response may bring up the new target for treatment.

糖尿病周围神经病变（DPN）是糖尿病致残致死的重要原因之一，其确切机制尚不清楚。本课题组确证了DPN患者周围神经中存在CD8+T细胞浸润和神经膜细胞（SCs）凋亡，且发现高糖可刺激SCs高表达CD8+T细胞趋化因子，故推测CD8+T细胞可能受SCs抗原诱导分化为特异性细胞毒性T细胞（CTL），并被趋化至周围神经组织，进而杀伤SCs致DPN发生。本研究拟采用免疫组化与TUNEL技术，明确DPN患者周围神经组织中特异性CTL浸润，并分析其与SCs凋亡及DPN病情的相关性；利用体外共培养体系，探讨DPN患者SCs诱导CTL生成，并趋化CTL的作用与途径，明确CTL杀伤SCs的作用；对高糖通过促进氧化应激刺激SCs表达特异性抗原的作用和机制进行初步研究；利用动物模型，探索免疫耐受方法治疗DPN的潜能。上述工作将从氧化应激诱导免疫反应的新角度探讨DPN的发病机制，并为DPN防治提供新思路。

糖尿病周围神经病变（DPN）是糖尿病致残致死的重要原因之一，如何有效防治DPN已成为全球慢性病防治工作关注的重大课题之一。周围神经组织脱髓鞘和轴突萎缩变性是DPN 主要病理改变，本课题确证了DPN患者周围神经中存在CD8+T细胞浸润和神经膜细胞（SCs）凋亡，并经体外细胞培养证实，高糖可激活CD8+T 细胞氧化应，通过p38MAPK信号通路诱导趋化因子受体CXCR3 高表达。进而通过免疫荧光组织化学检测发现，DPN 患者周围神经组织的神经膜细胞（SCs）中趋化因子CXCL9、CXCL10 和CXCL11 表达水平显著升高。故提出CD8+T细胞可能受SCs抗原诱导分化为特异性细胞毒性T细胞（CTL），并被趋化至周围神经组织，而DPN 患者SCs 可能在高糖作用下产生特异性抗原，经抗原递呈细胞（APC）诱导CD8+T 细胞分化为CTL，CTL在趋化因子作用下迁移至周围神经组织，进而诱导SCs 发生凋亡，影响神经正常生理功能，导致DPN 的发生发展。本研究遂进一步扩大人群，采用免疫组化与TUNEL技术，明确DPN患者外周血CD8+T细胞、周围神经组织中特异性CTL浸润水平，并确定其与SCs凋亡及DPN病情和预后的相关性；利用加入树突状细胞（DC）和IL-2体外共培养体系，明确DPN 患者SCs 诱导抗原特异性CTL 产生的作用；采用transwell 分室培养体系，明确高糖环境下SCs 趋化CTL 的作用与途径；进而以DPN 小鼠模型为研究对象，探讨免疫耐受对糖尿病周围神经病理与功能改变的影响。上述工作从氧化应激诱导免疫反应的新角度探讨DPN的发病机制，深入研究特异性CTL 产生，及其诱导SCs 凋亡导致DPN 发生发展的作用和机制，为进一步阐明DPN 的发病机制提供实验依据，为DPN 治疗提出免疫耐受干预的新思路。