膀胱移形细胞癌基因表达谱研究及尿液肿瘤标志物筛选

目前对膀胱肿瘤的诊断主要依赖于尿脱落细胞学、膀胱镜及影像学等，膀胱镜检查及可疑病变处活检仍是膀胱肿瘤诊断和随访的金标准，但此项检查属侵入性并伴有诸多并发症而在临床应用中受到限制。本项目拟应用人EST表达谱芯片，分别检测不同临床分期、不同病理分型以及各类复发和再发膀胱癌患者尿液标本，高效、特异、快速筛查尿液膀胱肿瘤相关基因，利用RT-PCR技术和免疫组化技术进行多样本的验证分析，以期寻找一组与BTCC早期诊断相关的尿液肿瘤标志物，探讨该组标志物与BTCC生物学行为的关系（包括临床分期和病理分型、浸润转移、复发和再发等）。尿液肿瘤标志物的临床应用有望提高BTCC的早期诊断水平，相关基因的功能及作用机理研究将为BTCC的基因治疗提供新的候选靶位点。

膀胱移行细胞癌是我国泌尿生殖系统最常见的肿瘤，其发生发展的许多环节尚不能用单一的分子或基因变化来解释，它是一个复杂的多阶段过程，是多因素参与、多步骤完成、多种肿瘤相关基因表达失常或肿瘤抑制基因失活所致。目前对膀胱肿瘤诊断主要依赖于尿常规分析、尿脱落细胞学检查、膀胱镜及影像学等。膀胱镜检查及可疑病变处活检仍是膀胱肿瘤诊断和随访的金标准，但此项检查属侵入性并伴有诸多并发症而在临床应用中受到限制。随着分子生物学技术的飞速发展，应用全基因组寡核苷酸基因芯片技术，高效、特异、快速筛查膀胱肿瘤相关基因已成为可能。.我们采用70 mer 全基因组寡核苷酸基因芯片研究膀胱癌基因表达谱，获得差异基因并筛选出膀胱癌特异的肿瘤标志物，构建浸润性膀胱癌基因互作网络图并对筛选出的网络中心节点进行尿脱落细胞的验证分析，将mRNA表达谱芯片筛选到的浸润性膀胱癌126个共同差异表达基因，导入STRING 在线数据库进行分析，绘制差异基因互作网络图，并将互作网络数据导出到Cytoscape 2.6.2 软件中，筛选出网络中心节点。我们对72例膀胱肿瘤患者和83例患有其他泌尿系疾病的对照组采用实时定量RT-PCR 对差异最大的基因进行尿脱落细胞的验证。在拥有21,639个探针的全基因组芯片上，发现膀胱癌基因表达谱共同差异表达基因126 个，其中表达上调的基因69 个，下调基因57个。共有103个膀胱癌共同差异表达基因经STRING筛选存在相互作用，并构成一个复杂的互作网络图。Cytoscape共筛选出23个网络中心节点，广泛参与肿瘤发生的多条信号通路。实时定量RT-PCR 验证分析结果表明，IGF-1、hTERT、BLCA-4和 HOXA13总RNA在Ta, T1和>T1期的膀胱移行细胞癌检出率分别为48%、90%和100%，特异性为85%。30例尿路感染的对照组病人特异性为80%。所选的这四个基因最后组合测验(uRNA-D)能区分1、2级和3级或分期≥T1的膀胱移行细胞癌，特异性和敏感性为80%。本项目应用人EST表达谱芯片，分别检测不同临床分期、不同病理分型以及各类复发和再发膀胱癌患者尿液标本，高效、特异、快速筛查尿液膀胱肿瘤相关基因，以期寻找一组与BTCC早期诊断相关的尿液肿瘤标志物，探讨该组标志物与BTCC生物学行为的关系（包括临床分期和病理分型、浸润转移、复发和再发等）。尿液肿瘤标志物的临床