FLJ20420通过PKA/CREB通路促进肺癌转移分子机制的研究

We found FLJ20420 was positively correlated with invasion and metastasis in lung cancer cells and tissues, and FLJ20420 may promote lung cancer metastasis by PKA/ CREB signaling pathways.By immune co-precipitation and the imaging techniques, From molecular, cellular, animal, and level of in vivo and in vitro. This study will explicit FLJ20420 promoting lung cancer metastasis through PKA/CREB pathways, and study the way of actions FLJ20420 with PKA/ CREB signaling pathway and its related molecules .We will clarify whether FLJ20420 promote the invasion and metastasis of lung cancer by PKA/CREB pathways and its related WASP targeted genes, the interactions and molecular mechanism between FLJ20420 with these above signal molecular, which can clear whether inhibiting FLJ20420 will regulate PKA/CREB signaling pathways by WASP and F - actin expression, and inhibit metastasis of lung cancer cell,to explore FLJ20420 as targets for inhibition of the molecular mechanisms of invasion and metastasis of lung cancer.To provide theoretical basis and experimental evidence for lung cancer research of metastasis specific molecular targets and development small molecular targeted drugs of inhibiting and/or reversing lung cancer metastasis, it has important theoretical significance and clinical application prospects.

本课题组前期发现FLJ20420在肺癌细胞和组织中与侵袭转移呈正相关，且FLJ20420可能通过PKA/CREB信号通路促进肺癌转移。本研究拟通过免疫共沉淀和活体成像等技术，从分子、细胞、动物及体内外水平，明确FLJ20420通过PKA/CREB通路促进肺癌转移的作用，同时研究FLJ20420与PKA/CREB信号通路及其相关分子之间的关系及作用方式。阐明其是否通过PKA/CREB通路及WASP等相关靶基因促进肺癌的侵袭转移以及其与以上信号分子之间的相互作用及分子机制，进而明确能否通过抑制FLJ20420调控PKA/CREB信号通路下调WASP及F-actin表达，抑制肺癌细胞转移，探讨以FLJ20420为靶点抑制肺癌侵袭转移的分子机制。为针对肺癌转移特定分子靶点研究和开发抑制或/和逆转肺癌转移的小分子靶向药物提供理论基础和实验依据，具有重要的理论意义和临床应用前景。

前期发现FLJ20420在肺癌细胞和组织中与侵袭转移呈正相关，且FLJ20420可能通过PKA/CREB信号通路促进肺癌转移。本研究拟通过免疫共沉淀等技术，从分子、细胞水平，明确FLJ20420通过PKA/CREB通路促进肺癌转移的作用，同时研究FLJ20420与PKA/CREB信号通路及其相关分子之间的关系及作用方式及其与以上信号分子之间的相互作用的分子机制，进而明确能否通过抑制FLJ20420调控PKA/CREB信号通路下调WASP及F-actin表达，抑制肺癌细胞转移。研究结果发现，发生转移的肺癌组织中FLJ20420基因表达明显高于无转移组，且在FLJ20420基因低、中、高表达组，患者发生转移的比例依次增高；在细胞侵袭转移和划痕实验中，将FLJ20420基因沉默后，细胞的侵袭转移及迁移率均明显降低，过表达FLJ20420基因后细胞的侵袭能力和转移能力均明显增强；EDU kit检测细胞增殖发现FLJ20420基因干扰组与对照组相比，细胞增殖率有所降低，FLJ20420基因过表达组与空载体组比较，细胞增殖明显增加；FLJ20420基因干扰后细胞平板克隆形成率降低，过表达后细胞平板克隆形成率明显升高；FLJ20420沉默后CREB及WASP表达均有降低，过表达FLJ20420后两者表达均有明显升；免疫荧光发现FLJ20420干扰后CREB及WASP及其蛋白磷酸化形式表达均有降低，过表达FLJ20420后相关蛋白表达均有升高；FLJ20420在肺癌组织中表达高低与肺癌组织细胞的高低分化明显有关，分化越低FLJ20420表达水平越高。同时其表达与肺癌的转移也显著相关，表达越高发生转移的可能性越大。肺癌组织及癌旁正常组织中FLJ20420、CREB表达差异显著，癌组织中FLJ20420、CREB表达均高于癌旁正常组织，分析还发现两者表达有明显的相关性；PKA信号通路激活剂和抑制剂对FLJ20420的表达无明显影响，PKA通路激活剂对PKA-R1、P-WASP、Profilin、Cofilin等有恢复作用；Co-IP技术检测FLJ20420及CREB、PKA确实形成了复合物进一步证实FLJ20420可能通过与CREB、PKA形成复合物参与调控信号通路而促进肺癌的侵袭转移。为针对肺癌转移特定分子靶点研究和开发抑制或/和逆转肺癌转移的小分子靶向药物提供理论基础和实验依据。