miR-146a在肠源性内毒素促肝纤维化中的作用及机制研究

The mechanism and therapy of organ fibrosis especially the Liver fibrosis is a hotspot. Gut-derived endotoxin plays an important role in liver fibrogenesis, with the mechanism unknown. Endotoxin may activate hepatic stellate cells through TLRs/ NF-κB / Bambi pathway mediating liver fibrosis. IRAK1 and TRAF6 are two important molecules of this pathway. Our previous studies have found that clearing the intestinal toxin reduced CCl4-induced liver fibrosis, and miR-146a overexpression mice whose CCl4-induced liver fibrosis was also significantly reduced. IRAK1,TRAF6 and Smad4 are proven target genes of miR-146a. It suggests that miR-146a may play a key role in liver fibrosis by regulating these genes.This study will research the function of miR-146a on TLR4 and TGF-β1 pathway during the process of HSC activation by endotoxin with lentiviral vectors regulating miR-146a level in liver, disclosing the function and molecular mechanism of miR-146a on the process of gut-derived endotoxin promoting liver fibrosis. It will provide a theoretical basis for discoving new therapeutic targets of hepatic fibrosis.

以肝纤维化为代表的脏器纤维化形成机制及防治是目前研究热点。肠源性内毒素在肝纤维化发生、发展过程中起重要作用，其机制不明。可能与内毒素激活肝星状细胞的TLRs/NF-κB/Bambi信号通路有关，其中IRAK1和TRAF6是该通路的重要分子。课题组前期研究发现清除肠源性内毒素可减轻CCl4诱导的肝纤维化，miR-146a过表达小鼠其CCl4诱导的肝纤维化明显减轻。IRAK1、TRAF6和Smad4是已证实的miR-146a的靶基因，故推测miR-146a可能通过调控这些关键位点发挥作用。本课题拟在上述工作的基础上应用慢病毒载体靶向调控肝组织中miR-146a的水平，研究miR-146a对内毒素激活肝星状细胞过程中TLR4信号通路和TGF-β1信号通路的影响及其调控的关键分子，明确miR-146a在肠源性内毒素促肝纤维化中的作用及可能的分子机制，为探索干预肝纤维化进展的新靶点提供理论依据。

肝纤维化是各种病因所致慢性肝病进展为肝硬化的必经过程，肝硬化及其并发症严重危害人类健康。研究肝纤维化发生、发展机制，发现干预肝纤维化进展的关键分子靶点具有重要临床意义。本研究探讨miR-146a是否能作为干预肝纤维化的靶点及其具体机制。. 研究分体内外实验两部分。体内部分，SD大鼠CCL4腹腔注射10周造肝纤维化模型，结果发现模型组较对造组miR-146a表达水平下降，尾静脉注射miR-146a过表达腺病毒，结果发现miR-146a可减轻大鼠肝纤维化。机制研究发现，肝纤维化模型肠源性内毒素水平增高，运用PCR/WB/IHC等分子生物学方法发现miR-146a通过调控TLR4/NF-κB/Bambi通路和TGF-β1/Smad4通路，抑制肝星状细胞活化（HSC）从而发挥抗纤维化作用。体外部分，LPS刺激原代HSC模拟肠源性内毒素促HSC活化，通过慢病毒过表达或干扰HSC的miR-146a水平，运用PCR/WB/IHC等分子生物学方法和rescue试验等方法证实miR-146a通过调控TLR4/NF-κB/Bambi通路和TGF-β1/Smad4通路，抑制LPS诱导的HSC活化。. 在研究中我们还发现，miR-146a通过靶向TGF-β1/Smad4通路抑制肝细胞的上皮间质转化（EMT）减缓肝纤维化的进展。.通过该研究，我们发现miR-146a作用于肝纤维化发生中的多细胞多通路，可作为干预肝纤维化的重要靶点。