基于组分协同效应的维药雪菊防治冠心病的物质基础和作用机理研究

Coronary artery disease (CAD) is a leading killer of human all over the World. The research of it's medical therapy is a focus in the academic field. National herbs are abundant with natural resources to find the druggery for CAD. Coreopsis tinctoria Nutt.,an Uyghur herb, is to be a focus in Xinjiang Uygur Autonomous Region of China because of its excellent therapeutic efficacy for CAD and be cultivated widely in Hetian. Accordingly the material basis and the functional mechanism for treating coronary artery disease of Coreopsis tinctoria Nutt. is a question which need be resolved quickly. .To study on the material basis and functional mechanism by the synergistic effect of flavones and polyacetylenes in this project on the basis of previous works. To combine the analysis of the compounds in activated part by HPLC-DAD-ESI-MS/MS and studing in vivo on pharmacy to assay the effects of the activity parts on hemodynamic parameters and myocardial infarct size of rat model of coronaryheart disease and filter activity parts and their matching of Coreopsis tinctoria Nutt to treatment for CAD. To discuss the functional mechanism on effects of activities of fat decrease, anti-oxidative, anti-inflammatory and MMP-9 by activity parts of Coreopsis tinctoria Nutt. Results of the research will promote the development of drug for CAD, Uyghur medicine and local economy.

冠心病是威胁人类健康的"第一杀手"，民族药是筛选其防治药物的宝库。雪菊（Coreopsis tinctoria Nutt.）是新疆地区用于防治冠心病的重要民族药之一，近年来新疆和田等地已开始大面积栽培，然而药效物质基础研究的严重滞后极大阻碍了雪菊开发为现代民族药的进程。.本课题是申请者对雪菊药效物质基础研究工作的延续，项目基于民族药多组分协同作用的特点，利用HPLC-DAD-ESI-MS/MS快速分析技术，结合体内药效学方法，解析雪菊主要含有的黄酮和聚炔类有效部位不同配比组合对整体动物（冠心病大鼠模型）的血流动力学、心肌缺血面积等与冠心病密切相关的药效学指标的影响，筛选具有治疗冠心病作用的有效部位，确定部位间的最佳配比。同时，基于有效部位对脂质代谢指标和MMP-9等指标的影响，探讨其作用机制。研究结果对于基于雪菊开发抗冠心病新药，发扬维吾尔族医药文化，带动新疆地方经济均具有重要意义。

雪菊为菊科金鸡菊属植物两色金鸡菊Coreopsis tinctoria Nutt.的干燥头状花序，又名新疆昆仑雪菊，具有清热解毒、活血化瘀之功效。近年来，雪菊因防治冠心病的疗效显著，被广泛应用。本研究采用单因素法结合正交试验法，建立了雪菊的黄酮和聚炔部位的富集工艺。采用HPLC技术建立了雪菊黄酮、聚炔部位的指纹图谱并对主要色谱峰的进行了归属和定量研究。黄酮部位HPLC指纹图谱共9个色谱峰，利用HPLC-MS2分析结合对照品对照鉴定出其中7个色谱峰的结构，分别为二氢马里苷、3，,5，,7，-三羟基二氢黄酮-7-O-葡萄糖苷、3，,4，,7，,8，-四羟基二氢黄酮、槲皮万寿菊苷、马里苷、木犀草苷、奥卡宁；测定了其中主要成分奥卡宁和马里苷的含量，分别为0.092mg/mg、0.142mg/mg，并明确了9个主要色谱峰的比例关系为2.36:0.18:1.47:0.26:0.28:1.05:1:0.45:0.57。聚炔部位HPLC指纹图谱共有色谱峰5个，其中3个为聚炔类成分，通过分离、结构鉴定，分别为金鸡聚炔苷A、E、(E)-7-phenyl-2-heptene-4,6-diyn-1-ol，其中金鸡聚炔苷E为新化合物，含量分别是0.2439 mg/mg、0.070 mg/mg、0.0068 mg/mg。. 本项目选择与冠心病密切相关的脂质代谢因素作为研究内容，采用对前脂肪细胞活性、分化的影响体外实验，对黄酮和聚炔部位进行活性考察，结果表明黄酮部位能够显著抑制 3T3-L1 前脂肪细胞的活性与分化，降低细胞中脂质含量，而聚炔部位对 3T3-L1 前脂肪细胞分化无明显影响，与黄酮部位亦不存在协同作用。在此基础上，采用高脂血症小鼠模型，验证黄酮部位对高脂血症小鼠糖脂代谢的影响，并从基因水平探讨了抑制细胞分化的机制。黄酮部位对 3T3-L1 前脂肪细胞分化的抑制作用主要是通过抑制分化转录因子 PPARg，C/EBPa， mRNA，抑制脂肪合成关键酶 ACS1 mRNA，促进脂肪分解关键酶 HSL mRNA 表达来实现的。. 本项目的研究表明，维药雪菊对小鼠脂质代谢确有显著影响，其物质基础为黄酮部位，得到整体动物实验的验证并在分子水平阐明了机理。对脂质代谢的调节很可能是雪菊防治冠心病的重要途径之一。