基于"有故无殒"理论的莪术生殖发育毒性反应评价模式的研究

"有故无殒"理论源自于《黄帝内经》，是中医对妊娠用药安全的权衡准则。目前基于正常动物的中药生殖发育毒性研究限制了临床用药的合理剂量，也使中药安全性在国际上受到质疑。中医临床实践表明，峻烈药物使用于患有适应证候的妊娠妇女，表现出治疗作用而并未出现生殖发育毒性。因此，我们提出"血瘀证是活血化瘀类中药生殖发育毒性与治疗作用选择性表达的基础"这一科学假说。为了验证该假说，本项目采用毒理学、药效学、药物动力学、分子生物学等现代科学研究方法和手段，并以血瘀证动物模型为研究对象，选用适用于此证的孕妇禁服中药莪术为工具药，通过观察其对受精雌性大鼠生理生殖状态及胎仔发育的影响，对莪术生殖发育毒性进行整体评价并探讨其机理。科学地佐证"有故无殒"的中药辨证减毒理论，对构建符合中医理论和临床实际的中药生殖发育毒性研究体系具有重要的理论和现实意义。

本项目研究按计划完成了相关内容，并增加仔鼠生理发育指标（出牙、开眼、张耳和出毛）和负趋地性指标的检测。我们采用Wistar雌性大鼠随机平均分为血瘀证组和正常组；采用皮下注射盐酸肾上腺素及冰水浴复制大鼠血瘀证模型。造模结束后，雌雄2:1合笼，受孕后正常组和血瘀证组孕鼠随机分为1.4 g/kg莪术量、2.8 g/kg莪术组和5.6 g/kg莪术组和对照组。于妊娠6 d～19 d连续灌胃给予不同剂量的莪术水煎液。检测母鼠的生殖毒性、仔鼠的发育毒性、学习记忆和海马组织凋亡等指标。结果。正常大鼠和血瘀证大鼠给予莪术暴露后两者神经行为发育毒性存在差异。在莪术高剂量组，正常大鼠的负趋地性和断崖回避达标日龄明显延迟，而血瘀证模型大鼠的仔鼠各项指标与对照组比较无显著性差异。正常大鼠和血瘀证大鼠给予莪术后，两者生殖发育毒性反应存在差异。莪术组的正常孕大鼠和血瘀证孕母鼠的卵巢质量、卵巢脏器系数、黄体数、吸收胎数、死胎数和着床数的差异均无统计学意义。在莪术高剂量组，正常大鼠的体重、摄食量、窝均产仔数、活胎体重、胎仔肛殖距等明显下降，而血瘀证模型大鼠及子代各项指标与对照组比较无显著性差异。正常大鼠和血瘀证大鼠给予莪术暴露后两者仔鼠学习记忆能力存在差异。在莪术高剂量组，正常大鼠组仔鼠逃避潜伏期明显延长，而过台次数明显减少，而血瘀证模型大鼠组仔鼠的逃避潜伏期和过台次数与对照组比较无显著性差异。仔鼠脑组织TUNEL阳性细胞数结果表明，莪术诱导正常大鼠和血瘀证模型大鼠仔鼠的神经细胞凋亡具有差异，诱导正常大鼠仔鼠海马细胞凋亡的效应更明显。采用分光光度法检测仔鼠脑组织caspase-3和caspase-9活性结果显示，莪术诱导正常大鼠和血瘀证模型大鼠仔鼠的caspase-3和caspase-9活性具有显著性差异，正常大鼠仔鼠海马caspase-3和caspase-9活性明显增高。Western blot结果表明，莪术诱导正常大鼠和血瘀证模型大鼠仔鼠的p-JNK表达具有显著性差异，正常大鼠仔鼠海马p-JNK表达明显增高。这些研究结果提示，血瘀状态的大鼠对莪术水煎液的生殖发育毒性的耐受力较强，表明中医“辨证减毒”的重要性。这与传统中医药理论中的“有故无殒，亦无殒”相符合。通过本课题研究培养硕士研究生2名，3篇本项目研究论文被国内核心期刊接受采用。