Sohlh2在精原干细胞分化中作用和作用机制的实验研究

Sohlh2(Spermatogenesis and oogenesis hlh transcription factor 2)是一个促进精原细胞分化的关键基因。申请者建立了sohlh2基因敲除小鼠，通过基因芯片技术分析sohlh2+/+和sohlh2-/-睾丸差异表达基因，证实sohlh2缺失可促进精原干细胞(SSCs)特异基因oct4,sox2等表达，且SSCs数量明显增加。为进一步阐明sohlh2在SSCs分化中的作用及其机制，我们将建立SSCs细胞系，通过SSCs基因转染和RNAi方法，检测sohlh2、oct4和sox2在SSCs自我更新和分化中的作用；并用启动子luciferase报告系统，分析sohlh2与oct4/sox2之间的表达调控关系，从而揭示SSCs增殖和分化的分子调控机制，为阐明精子发生机制、精原细胞瘤的形成机制，以及为男性不育的基因诊断和治疗提供理论和实验依据。

Sohlh2(Spermatogenesis and oogenesis basic helix-loop-helix transcription factor 2)是调控精原细胞分化的关键基因。根据前期的实验结果，sohlh2-/-小鼠睾丸中精原干细胞( Spermatogonial stem cell,SSCs)特异基因oct4,sox2,GFRa1等表达明显增加，且SSCs数量增多。本课题深入研究了sohlh2在体外SSCs分化过程中的作用，以及与SSCs自我更新相关基因oct4和sox2的相互作用，进一步阐明了SSCs自我更新和分化的分子调控机制。.利用建立的野生型和sohlh2-/-SSCs细胞系，通过基因转染、RNA干扰、免疫荧光染色和FACS等方法，检测了sohlh2在体外SSCs自我更新和分化过程中的作用。结果显示，sohlh2不影响SSCs的自我更新，但可促进SSCs分化；通过RNA干扰oct4和sox2表达，证实了oct4可通过抑制sohlh2和c-kit表达，促进SSCs的自我更新，但sox2促进SSCs自我更新的作用不明显；通过染色质免疫共沉淀（CHIP）的方法，证实了作为转录因子的sohlh2和oct4之间无直接的调控作用，sohlh2是通过直接作用于c-kit启动子，上调c-kit表达，从而促进SSCs分化。本研究不仅揭示了sohlh2在SSCs分化过程中的作用和作用机制，而且有助于阐明精子发生的分子调控机制，为男性不育症的基因诊断和治疗提供实验依据。.另外，根据实验结果，增加了部分实验内容，如支持细胞分泌因子BMP4对SSCs分化的影响及sohlh2表达的调控，支持细胞增殖的调控机制，sohlh2在人睾丸组织中的表达状况等，这些实验为我们深入和全面了解SSCs自我更新和分化机制，以及了解sohlh2在人精子发生中的作用提供了实验依据。.本课题培养硕士研究生2名，在国内外核心刊物发表论文4篇，SCI收录2篇。