TGFB1基因多态性与上皮细胞－间质细胞转化：一种新的放射性肺损伤机制？

TGF-β1诱导Ⅱ型肺泡上皮细胞-间质细胞转化（EMT）是肺纤维化形成的关键环节之一。申请者在前期研究中发现，TGFB1基因rs1982073(T869C)野生型较变异型肺癌患者有更高的重度放射性肺损伤(RILT)发生风险。这一创新性发现强烈提示TGFB1基因多态性可成为预测肺癌患者RILT新的分子标记。在此基础上，本研究除在中国人群进一步验证前期发现外，还将利用分子转染技术建立表达TGFB1基因rs1982073(T869C)两种不同基因型的Ⅱ型肺泡上皮系，探讨它们在放射线作用后EMT和TGF-β1下游Smad通路分子表达的差异；且通过RNA干预阻遏其Smad4表达，明确TGF-β1及Smad信号通路在Ⅱ型肺泡上皮细胞放射线作用后发生EMT中的关键作用。为阐明RILT分子机制提供理论基础，为对其干预提供新的分子靶点，有望提高肺癌的治疗疗效。

在本项目的自助下，建立胸部放疗病人标本库共收集胸部放疗病人178例，对129例病人完成放射性肺炎的随访，并在汉族人群中对前期研究进行了验证；成功建立了放射性肺炎的动物模；运用慢病毒体系在貂肺上皮细胞（MV.1Lu）以及肺腺癌细胞系(A549，pc9)中分别建立对照组，TGF-β1突变型(+29C/Pro),TGF-β1野生型（+29T/Leu）三种稳转细胞系。在MV.1Lu中可以观察到TGF-β1突变型(+29C/Pro)细胞较TGF-β1野生型（+29T/Leu）细胞TGF-β1分泌水平更高，并且TGF-β1突变型(+29C/Pro)细胞较TGF-β1野生型（+29T/Leu）细胞明显发生了上皮间质间质转化（EMT），表现为波形蛋白（vimentin）的升高，并且在A549以及pc9中也可以观察到此现象。在前期研究中发现携带TGF-β1突变型(+29C/Pro)表型的人群放射性肺炎的发生风险较高，推测TGF-β1野生型（+29T/Leu）更易诱发EMT，但是与实际结果相矛盾，提示肺上皮细胞可能不是放射性肺炎的转化源细胞，EMT也可能不是发生放射性肺炎的主要机制。为了进一步解释这种现象，采用了高通量全基因组差异mRNA筛选的方法寻找两类细胞生物行为学差异的关键基因，发现VEGF信号通路是最为关键的通路以及VEGFA在野生型细胞中明显高表达，因此VEGFA被选为关键差异基因，具体机制非常值得更进一步的深入研究。