组蛋白去乙酰化酶1、8在肺上皮细胞间质转化中的调控作用及机制

肺纤维化是多种间质性肺疾病的共同结果，也是引起呼衰的重要原因之一。临床上传统的治疗包括糖皮质激素、免疫抑制剂等，以上药物对阻抑肺纤维化进展有一定疗效，但副作用大，应用受限。因此，进一步深入研究寻找更好的、毒性小的、安全的治疗肺纤维化药物迫在眉睫。研究表明，器官纤维化及EMT的发生，与组蛋白去乙酰化酶（HDAC）表达上调相关，而其抑制剂（HDACi）却能改善心、肾、肝及皮肤纤维化。本项目体内采用气管内注入博来霉素制备大鼠肺纤维化模型，以HDACi作为干预手段，采用组织病理、免疫组化及分子生物学技术检测方法，观察HDACi对对大鼠肺纤维化的干预作用，探讨其作用机制及相关信号通路；体外在培养的大鼠肺泡Ⅱ型上皮中加入HDACi及转染HDAC siRNA后，再加TGF-β1，观察二者对细胞表型、功能改变的影响。研究结果将明确HDACi抗肺纤维化的作用及机制，为改善肺纤维的的临床防治提供新的思路。

本项目完成情况：包括（1）在体外培养的大鼠肺泡Ⅱ型上皮细胞RLE-6TN中加入TGF-β1，观察了HDAC1、8及相关EMT标志物的表达情况；（2）采用HDACi TSA及HDAC1 siRNA技术，观察二者对RLE-6TN EMT过程中细胞形态、功能改变的影响及机制；（4）制备了大鼠博来霉素肺纤维化模型，以HDACi为干预手段，观察其对大鼠肺纤维化的阻抑作用。原拟开展的研究（2）部分中的HDACi SK7041，中国目前无代理商，故该部分实验未完成；（3）部分肺纤维化患者活检病例数太少，病变不典型，难于开展工作。.本项目取得成果：（1）加入TGF-β1后，RLE-6TN细胞E-cad蛋白表达下调，α-SMA表达上调，HDAC1及HDAC8蛋白表达上调；荧光显微镜下，E-cad表达明显减弱，胞浆内出现α-SMA表达；倒置显微镜下，细胞间隙变大，离散成单个，形态成梭形、纺锤形。细胞体外迁移能力增强。（2）应用HDACi TSA 后，细胞E-cad mRNA及蛋白表达上调，α-SMA、HDAC1及HDAC8蛋白的表达均下调；细胞间隙小，呈多边形铺路石状，细胞体外迁移能力减弱；应用HDAC1 siRNA后，其HDAC1、HDAC8mRNA表达下调，α-SMA mRNA的表达上调；E-cad蛋白表达上调、α-SMA及HDAC1蛋白表达下调；荧光显微镜下，E-cad蛋白呈颗粒状、膜及胞浆表达（对照组呈线状、膜表达），胞浆α-SMA弱表达，HDAC1蛋白表达减弱；（3）与博莱霉素肺纤维化模型组比较，干扰组大鼠上皮标志物E-cad mRNA表达上调，间质细胞标志物α-SMA、ColⅠ、FN、CTGF及HDAC8mRNA表达下调；上皮标志物E-cad 蛋白表达上调，间质细胞标记物CTGF、FN及ColⅠ蛋白表达下调，HDAC8蛋白表达下调；组织病理检查显示干扰组大鼠肺泡炎及肺泡间隔病变介于对照组和模型组之间。.结论：1、HDAC1参与了TGF-β1诱导的肺泡Ⅱ型上皮细胞间质转变（EMT）过程。2、HDAC抑制剂TSA及HDAC1 siRNA干扰可抑制其获得α-SMA表型、失去E-cad表型，从而部分逆转TGF-β1诱导的肺泡上皮EMT。3、TSA能部分抑制博莱霉素所致的大鼠肺纤维化。