结外NK/T细胞淋巴瘤-鼻型异常MicroRNA表达及作用机制研究

结外NK/T细胞淋巴瘤-鼻型（EN-NK/T-NT）是我国多发并具高度侵袭性的淋巴瘤。本研究组多年来在对该肿瘤细胞增殖和分化规律等分子遗传学基础，及重要基因突变和表达与其生物学特性的相关研究中有重要积累和发现。新近采用Real-time PCR对EN-NK/T-NT典型病例进行miRNA表达谱分析，显示数种miRNA显著升高或降低。本研究拟运用real-time PCR、基因重组转染、Western blot及组织原位基因表达等技术分析这些异常表达的miRNA及在EN-NK/T-NT中的特异性，与肿瘤细胞谱系来源及分化的关系；确定针对该肿瘤细胞增殖,分泌细胞毒分子及诱导肿瘤间质改变等方面具有显著调节作用的miRNA；并分析相关miRNA表达与EN-NK/T-NT肿瘤侵袭性及临床生物学特性的关系，为进一步揭示该肿瘤高度侵袭性的生物学特性分子机制提供新的证据。

本研究旨在通过多种分子生物学技术探讨在结外NK/T细胞淋巴瘤，鼻型（EN-NT/T-NT）中异常表达的miRNA及相关重要靶基因，及其与肿瘤发生发展及预后的相关性，旨在揭示EN-NT/T-NT肿瘤分子生物学基础，为临床诊断和治疗提供新依据。本研究首先采用Real-time PCR对EN-NT/T-NT的典型病例进行miRNA表达谱分析，筛选出8种异常表达的miRNAs；应用Real-time PCR及组织原位杂交表达技术分析该8种异常表达的miRNA在15例典型EN-NT/T-NT中的表达特异性，结果显示miR-223和miR-886-3p的表达在EN-NT/T-NT中呈特异性上调。靶基因预测结果提示肿瘤抑制性转录因子PRDM1为miR-223的靶基因，进一步通过免疫组化及Western blot技术证实miR-223与PRDM1蛋白在61例EN-NT/T-NT组织及4种NK肿瘤细胞系中表达呈明显负相关，应用双荧光素酶报告基因检测方法基因重组转染技术分别在肿瘤组织及肿瘤细胞系中证实了miR-223在转录后水平抑制PRDM1蛋白的表达。在对40例EN-NT/T-NT患者的随访及预后分析中得出PRDM1阳性表达与EN-NT/T-NT患者总体生存率及无病生存率呈正性相关。以上结果提示，肿瘤抑制因子PRDM1在EN-NT/T-NT中的表达下调受miR-223介导，其表达与EN-NT/T-NT的预后相关。下一步研究拟着重于PRDM1基因失活机制研究及基因的功能性研究，如基因突变、甲基化等方面的进一步深入研究。