补阳还五汤两类有效组分配伍抗VSMC增殖作用及入血成分分析的研究

在综合分析方剂配伍及药效物质研究现状的基础上，提出综合运用药物化学分析、药物入血成分分析、药理效应评价及多靶点机制研究等方法，系统地研究复方有效组分及其配伍的药效物质及作用原理的研究思路。在前期证明补阳还五汤两类有效组分生物碱和苷抗血管平滑肌细胞（VSMC）增殖作用的基础上，以两类有效组分为研究对象，研究二者配伍抗血管内膜增生的最佳剂量配伍，对二者的入血成分进行分析，比较有效组分配伍和入血成分组合的作用，从而揭示其作用的药效物质；采用体外VSMC增殖模型和血浆药理学方法，从VSMC细胞周期调控和JAK/STAT信号途径研究其作用机制。从而从整体、细胞、分子水平揭示二者配伍作用的物质基础和原理，形成一个成分相对清楚、作用机制明确的中药组分配伍方，为其进一步开发应用提供实验依据，也为中药方剂的现代研究提出一条行之有效的研究思路，对方剂的现代研究具有示范作用，有助于科学地揭示方剂配伍的科学内涵。

本项目研究了补阳还五汤抗血管再狭窄的有效组分及其抗血管平滑肌细胞（VSMC）增殖的作用。通过化学分析方法检测该方中主要有效组分的组成，进一步证明了苷类组分为该方抗血管增殖性病变的主要药效物质，重点开展了苷类组分提取分离方法和主要有效成分测定方法的研究，证明苷类组分的主要有效成分为黄芪甲苷、苦杏仁苷和芍药苷。选择胶囊为其剂型，对其制备工艺和质量标准进行了研究，形成了苷类组分胶囊剂型的稳定成型工艺。采用VSMC培养技术和血浆药理学方法，研究了苷类组分抗VSMC增殖的作用及其机制，并与其主要有效成分及其配伍进行了比较。结果发现：血小板衍生生长因子（PDGF）可诱导VSMC增殖，促进VSMC细胞周期转换，细胞周期相关蛋白CyclinD1、CDK4、PCNA表达增加，P21表达降低。苷类组分可抑制血小板衍生生长因子（PDGF）诱导的VSMC增殖，抑制VSMC细胞周期转换，使G0/G1期细胞增多，S期和G2/M期细胞减少，细胞周期相关蛋白CyclinD1、CDK4、PCNA表达降低，P21表达增强。有效成分黄芪甲苷具有相似的作用，但其作用弱于苷类组分；而三个主要有效成分配伍具有与苷类组分相同程度的作用。从PI3K/AKT、JAK/STAT和MAPK信号转导途径研究了苷类组分抑制VSMC增殖的作用机制。PDGF可使PI3K/AKT、JAK/STAT和ERK信号通路激活。苷类有效组分对PI3K/AKT、JAK/STAT和ERK信号通路的激活具有抑制作用。其主要有效成分黄芪甲苷、苦杏仁苷和芍药苷配伍具有与苷类有效组分相同的抑制效应。主要有效成分黄芪甲苷也具有抑制PI3K/AKT、JAK/STAT和ERK信号通路激活的作用，但其作用低于苷类有效组分和三个有效成分配伍。。证明了苷类有效组分抗VSMC增殖的作用是其中的主要有效成分配伍作用的结果，苷类有效组分及主要有效成分配伍抑制VSMC增殖的主要机制与抑制PI3K/AKT、JAK/STAT和ERK信号通路的激活有关。其科学义是：进一步阐明了补阳还五汤抗VSMC增殖的主要药效物质，为该方苷类有效组分治疗血管增殖性疾病的应用奠定了基础；对其抗VSMC增殖作用的进一步阐明，为进一步进行该方有效组分的开发研究，创制成分相对清楚、作用机制明确、质量稳定可控的有效组分中药提供了科学依据。