Wnt/Dvl/β-catenin通路在腺苷A1R介导电针诱导脑缺血耐受中的作用及机制研究

Electroacupuncture can be effective in the treatment of cerebral ischemia, but the molecular mechanism remains to be elucidated. Our previous studies have found both adenosine A1 receptor and β-catenin in Wnt/β-catenin pathway mediate cerebral ischemic tolerance induced by electroacupuncture. Other study shows adenosine A1 receptor agonist (CCPA) influences Dvl protein and GSK-3β, and silencing Dvl protein reverses the effect of CCPA in cell proliferation. We infer from the Wnt / Dvl / β-catenin pathway that electroacupuncture activates A1 receptor which induces Dvl phosphorylated onto membrane,which helps the form of Dvl / LRP6 signalingand acting as a key to promote the translocation of β-catenin into the nucleus resulting CIT. The aim of our study is to clarify that:1.To clear that electroacupuncture activate A1R,which helps Dvl protein phosphorylatthed into Dvl/LRP6 signalingand.2.To clear that Wnt/Dvl/β-catenin pathway is necessary to the CIT by A1R-mediated electroacupuncture. With the level of whole, tissue, cell, molecule and gene,we demonstrate firstly the effect and mechanism of Wnt/β-catenin pathway,which cause CIT mediated with electroacupuncture induced by adenosine A1 receptor.The study will give the scientific basis for the traditional Chinese medicine in the brain protection.

电针能有效治疗缺血性脑卒中，但分子机制有待阐明。课题组前期发现腺苷A1R和Wnt通路下游β-catenin均介导了电针诱导的脑缺血耐受（CIT）。研究进一步发现A1R激动剂CCPA影响Wnt通路上游Dvl及GSK-3β，Dvl沉默后逆转了CCPA的细胞增殖。我们从Wnt/Dvl/β-catenin通路角度推测：电针激活A1R发挥激酶作用，诱导Dvl磷酸化，上膜形成Dvl/LRP6信号小体，促使β-catenin集聚向胞核转位，产生CIT。本研究拟解决：1.阐明EA激活A1R，Dvl磷酸化上膜，结合LRP6形成Dvl/LRP6信号小体；2.阐明Wnt/Dvl/β-catenin通路是A1R介导电针CIT的必要条件。从整体、组织、细胞、分子、基因水平，首次论证Wnt/Dvl/β-catenin通路在A1R介导电针诱导CIT的作用及机制，为中医脑保护研究提供科学依据。

本项目聚焦电针预处理对缺血性脑卒中的神经保护效应和功能影响，探索研究Wnt/Dvl/β-catenin通路在腺苷A1R介导电针诱导脑缺血耐受中的作用及机制，重点围绕Wnt通路下游关键蛋白GSK-3β磷酸化、β-catenin，上游蛋白DVL、LRP6，及上述Wnt通路蛋白与电针激活腺苷A1R之间的调节。研究按照国家自然科学基金任务书进行，主要成果包括：.1）发表SCI收录论文9篇、中文核心期刊论文1篇；.2）授权国家专利3项；.3）举办继续教育培训班2场、参加国内学术交流7次；.4）获青年精英奖、科技进步奖和人才培养多项奖励。.5）培养研究生10名，其中1名博士、6名硕士已完成学业获得学位。.完成研究内容：.1、明确Wnt/Dvl/β-catenin通路介导电针诱导脑缺血耐受效应。证实MCAO造模后电针对Wnt信号通路下游关键蛋白β-catenin、上游关键蛋白LRP6、Dvl的调控影响。.2、明确Wnt通路下游关键蛋白GSK-3β的磷酸化水平在腺苷A1R介导电针脑缺血耐受中发挥关键作用。.3、明确腺苷A1R对电针预处理后Wnt通路上游关键蛋白LRP6、Dvl表达水平的影响，及药物干预腺苷A1R变化对缺血再灌注损伤梗死体积、凋亡细胞的影响。.4、抑制Wnt通路上游蛋白LRP6后，观察电针对缺血性脑损伤保护效应减弱。明确在实验动物水平，LRP6是电针刺激百会穴启动Wnt通路的关键蛋白。.5、明确在离体小鼠PC12细胞水平，Wnt通路上游蛋白LRP6是腺苷A1R激动剂CCPA介导脑缺血耐受的关键因素。.6、延伸探索LRP6的靶向调节基因miRNA-126的神经保护作用，夯实后继研究基础。.本研究首次论证了Wnt/Dvl/β-catenin通路在A1R介导电针诱导脑缺氧耐受的作用及机制，探索急性缺血性脑卒中的临床预防及治疗方法，为电针脑保护研究提供理论依据。