温阳补肾方调控RANKL/RANK/OPG信号通路治疗激素性股骨头坏死的实验研究

温阳补肾方是治疗激素性股骨头坏死（SANFH）的有效方剂，已获得国家发明专利受理。RANKL/RANK/OPG共同组成了调节破骨细胞分化、发挥骨吸收功能的一个关键环路调节系统，本研究通过建立兔激素性股骨头坏死模型和温阳补肾方血清对破骨细胞的作用，研究药物作用前后组织形态、细胞形态变化，免疫组化染色和荧光定量PCR检测RANKL、RANK、OPG的变化，探讨温阳补肾方调控RANKL/RANK/OPG信号通路治疗激素性股骨头坏死（SANFH）的相关机制，为进一步揭示温阳补肾方防治SANFH的作用靶点提供实验和理论依据，也为探讨中药治疗股骨头坏死提供新的思路。

温阳补肾方是治疗激素性股骨头坏死（SANFH）的有效方剂，已获得国家发明专利受理。 RANKL/RANK/OPG 共同组成了调节破骨细胞分化、发挥骨吸收功能的一个关键环路调节系统，本研究通过建立兔激素性股骨头坏死模型和温阳补肾方血清对破骨细胞的作用，研究药物作用前后组织形态、细胞形态变化，免疫组化染色和荧光定量 PCR 检测 RANKL、 RANK、OPG 的变化，探讨温阳补肾方调控 RANKL/RANK/OPG 信号通路治疗激素性股骨头坏死 （SANFH）的相关机制。.本研究成功建立了新西兰大白兔SANFH模型。通过光镜股骨头石蜡切片HE染色观察到温阳补肾方可改善SANFH股骨头病理变化。通过酶联免疫法检测观察到温阳补肾方可上调血清OPG含量下调血清RANKL、RANK含量。通过电镜观察到温阳补肾方可改善SANFH坏死组织中骨细胞超微结构的变化。通过RT-PCR检测观察到温阳补肾方可提高OPG的mRNA表达，降低RANKL及RANK的mRNA表达。通过Western-Blot检测观察到温阳补肾方可提高OPG的蛋白表达，降低RANKL及RANK的蛋白表达。.温阳补肾方能增加Harris评分中功能评分，且优于对照组(P＜0.05)。40 ng/mL RANKL和20 ng/mL M-CSF诱导因子联合诱导RAW264.7细胞后，经TRAP染色鉴定后，可获得成熟破骨细胞。TRACP活性随温阳补肾方低、中、高剂量组含药血清干预时间逐渐降低。实时荧光定量PCR检测结果提示温阳补肾方可降低破骨细胞Cathepsin-K基因、MMP-9基因表达，中剂量组＜高剂量组＜低剂量组，差异有统计学意义(P＜0.05)。ELISA法检测结果提示温阳补肾方培养上清液中RANK含量与空白对照组比较，差异有统计学意义(P＜0.05)，温阳补肾方高剂量组＜中剂量组＜低剂量组。免疫组化法提示温阳补肾方可减少RANK表达量，高剂量组＜中剂量组＜低剂量组，差异有统计学意义(P＜0.05)。实时荧光定量PCR检测结果温阳补肾方可降低RANK基因表达，中剂量组＜高剂量组＜低剂量组，差异有统计学意义(P＜0.05)。.本项目如期完成研究计划，已发表13篇相关论文（其中SCI源2篇）。培养2位博士生（均已毕业）。本研究为探讨中药治疗股骨头坏死提供了新的思路。