温阳补肾中药促进骨髓基质细胞转化的实验研究

温阳补肾中药巴戟天、淫羊藿、骨碎补、鹿角胶是骨伤科最常用的促进骨生成的药物，主治骨折与骨质疏松症，但其作用机理目前尚不完全清楚。前期研究发现：巴戟天、淫羊藿、骨碎补、鹿角胶均能显著促进骨髓基质细胞（MSC）增殖。且巴戟天可促进分化中的成骨细胞分泌碱性磷酸酶、合成骨钙素；可以促进成骨细胞表达转化生长因子β1和核心结合因子α1，从而大量分泌Ⅰ型胶原，以利于钙盐沉积。本研究将采用分子生物学技术，进一步观察并比较四味中药对体外培养MSC凋亡及成骨分化的影响，阐述四味中药温补肾阳的作用途径和环节，明确四味中药促进骨生成的最佳药物剂量，最终研制出有科学根据的、高效、速效、体积小、剂量小以及贮存、携带方便的新型中药，为中药药效评价、质量标准作出有益探索，以提高中医药学术水平，促进中医药学术发展，丰富中医药理论。

温阳补肾中药巴戟天、淫羊藿、骨碎补、鹿角胶是骨伤科最常用的促进骨生成的药物，主治骨折、痹证（骨关节炎）、骨坏死及骨质疏松症等，本研究主要观察与比较巴戟天、淫羊藿、骨碎补、鹿角胶等温阳补肾中药对体外培养骨髓基质细胞(BMSCs)增殖、凋亡及成骨分化的影响，为探索冶疗骨折、痹证（骨关节炎）与骨质疏松症的有效药物进行基础性研究。.本研究建立SD大鼠骨髓基质细胞(BMSCs)体外培养体系，采用倒置显微镜、HE染色进行形态学观察；流式细胞仪（FCM）进行BMSCs周期分析；MTT法检测BMSCs生长曲线；4味温阳补肾药含药血清配制，确定其最佳药物浓度和最佳血清浓度对BMSCs促增殖的影响。结果表明：体外培养大鼠BMSCs经倒置显微镜、HE染色的形态学观察均符合BMSCs的形态及生长特点。高、中、低剂量的四味中药含药血清对F3 BMSCs 24、48、72h的增殖效应显示，以中剂量组20%含药血清对F3 BMSCs 48h后促增殖最明显，其组间比较结果为淫羊藿>骨碎补>鹿角胶>巴戟天>空白组。结论：巴戟天、鹿角胶、淫羊藿、骨碎补四味温阳补肾药均有促BMSCs增殖作用，淫羊藿促BMSCs增殖效果最佳。.本研究还观察和比较巴戟天、鹿角胶、淫羊藿、骨碎补对体外培养SD大鼠骨髓基质细胞(BMSCs)抗凋亡的影响，了解温阳补肾药抗凋亡的作用途径。方法：建立IL1β诱导BMSCs凋亡体系，然后用温阳补肾药进行抗凋亡。进行形态学观察；采用流式细胞仪检测凋亡率；凋亡细胞DNA电泳；荧光定量PCR检测bax、bcl-2mRNA的表达；Western Blot检测bax、bcl-2蛋白的表达。结果表明：综合数据显示四味中药含药血清对IL1β诱导凋亡的BMSCs均有抗凋亡作用，其组间比较结果为巴戟天>淫羊藿>骨碎补>鹿角胶>空白组。结论：巴戟天、鹿角胶、淫羊藿、骨碎补均能抗BMSCs凋亡，其机制主要是上调抑制凋亡基因Bcl-2的表达，下调促进凋亡基因Bax的表达，巴戟天抗BMSCs凋亡作用最强。.本项目如期完成研究计划，已发表6篇相关论文（其中SCI源1篇），另有1篇已录用，即将发表。培养4位博士生（已毕业3名）。其成果“闽产南靖巴戟天促进骨生成的实验研究”获2010年福建省科技进步三等奖。