MCD病理进程中FLT4调控的microRNA鉴定及其功能分析

Malformation of cortical development (MCD) represents a well-recognized cause of intractable epilepsy in children patients. Previous studies have shown that malformed neurons, a characterized pathological feature of MCD, may arise from neuronal progenitor cells of the subventricular zone (SVZ). However, the detailed mechanism regarding proliferation and migration is unclear. We demonstrated previously that FLT4 is highly expressed in malformed neurons and in SVZ of the side with epileptogenic foci in MCD rats.Based on the fact that constant migration of neuronal progenitor cells to MCD regions from the SVZ, using a range of methods including the Chip, bioinformatics and in situ hybridization,this project will focus on: 1) to identify the miRNA molecules which positively regulated by FLT4; 2) to reveal the roles of FLT4 and miRNA in pathogenesis of MCD; 3) to elucidate the roles and mechanisms of FLT4 and miRNAs in the proliferation and migration of SVZ neuronal progenitor cells. The aim of the present project is to confirm the hypothesis that high FLT4 expression and its target miRNAs may be involved in the pathogenesis of MCD. The results may provide new clues for the pathogenesis of MCD.

皮质发育障碍（MCD）是儿童药物难治性癫痫的重要病因。脑室下区（SVZ）神经元祖细胞群是异形神经元-MCD病理核心的主要来源之一，但其增殖与迁移调控机制尚不清楚。我们前期发现FLT4特征性高表达于异形神经元及MCD大鼠痫侧SVZ区，结合神经元祖细胞不断迁移至MCD脑区形成异形神经元的前期基础；本项目拟利用MCD大鼠模型，以神经元祖细胞为中心，以FLT4为切入点，从FLT4及其调控的miRNA角度，通过芯片、生物信息学及原位杂交等方法，鉴定出FLT4正向调控的miRNA分子；明确FLT4、miRNA表达在MCD病理进程中的意义；阐明FLT4及其调控的miRNA在SVZ区神经元祖细胞增殖与迁移中的作用及机制。本研究旨在证实"高表达FLT4可能通过其调控的miRNA参与MCD病理发生"的研究假设，为进一步揭示MCD病理形成过程提供新线索，也可为解析MCD致痫机制提供理论依据。

皮质发育障碍（MCD）是儿童药物难治性癫痫的重要病因。非编码RNA作为表观遗传学的一个重要组成部分成为近来研究的焦点，而MicroRNA（miR）作为小分子非编码RNA家族的重要成员，目前表明其紊乱涉及癫痫病理而备受关注。我们前期发现FLT4特征性高表达于异形神经元及MCD大鼠痫侧SVZ区，结合神经元祖细胞不断迁移至MCD脑区形成异形神经元的前期基础；提出“FLT4高表达MCD区可能通过调控相关miRNA紊乱参与MCD病理形成”假设。本项目以正常脑组织样本为对照，首先利用临床MCD亚型FCD临床样本，通过小RNA测序及RT-PCR验证的方法，筛选及鉴定出FLT4高表达FCD样本中差异miRNA分子；其中筛选鉴定出包括目前已知的miRNA群中差异表达的miRNA以及Novel miRNA群中的差异miRNA；通过与国外目前已有miRNA文献对比分析发现，本研究获得的已知miRNA群中差异表达的miRNA结果与国外报道基本一致；进一步丰富证实了了miRNA紊乱参与MCD病理形成的假说。在此基础上，本研究进一步获得了Novel miRNA群中的差异miRNA，并从中选取了miRNA分子正在制备转基因小鼠动物模型，为进一步阐明miRNA功能奠定基础。本项目结果初步证实"高表达FLT4可能通过其调控miRNA参与MCD病理发生"的研究假设，为进一步解析MCD致痫机制提供理论依据。