日本血吸虫尾蚴期MicroRNA鉴定和功能分析

日本血吸虫病仍然是我国重要的公共卫生问题之一。日本血吸虫具有复杂基因调控模式，对基因表达调控的研究将有助于了解血吸虫的生物学规律。MicroRNA是真生物体内一类非常重要的调控因子，日本血吸虫目前仅在成虫期中鉴定了5个miRNA分子，且抽提较完整的尾蚴RNA是利用传统方法鉴定尾蚴期miRNA的瓶颈。本课题前期鉴定了日本血吸虫来源的3个Ago亚家族分子,拟通过对尾蚴阶段Ago蛋白质进行免疫共沉淀，捕获并鉴定其相关的miRNA，分析所鉴定miRNA在不同发育期的表达水平及潜在的靶基因，探讨miRNA的潜在功能。本研究将进一步丰富日本血吸虫miRNA的信息，增强对日本血吸虫不同发育阶段基因表达调控的认识，为血吸虫病的防控提供新思路。

日本血吸虫病是我国危害最为严重的寄生虫病，也是重要的公共卫生问题之一。日本血吸虫具有复杂的生活史和基因调控模式，对基因表达调控的研究将有助于了解血吸虫的生物学规律。Small non-coding RNAs是真生物体内一类非常重要的调控因子。本项目主要利用Solexa高通量测序方法结合生物信息学分析初步揭示日本血吸虫不同种类small non-coding RNAs在不同发育阶段的表达规律；完成了日本血吸虫miRNA的分期表达谱的构建，发现日本血吸虫miRNA呈现期偏好性表达和性别差异表达，为进一步研究miRNAs在适应日本血吸虫适应雌雄异体生活方式，维持性别分化状态中发挥的作用奠定了基础。本项目同时对日本血吸虫Argonaute基因的分期表达规律，完成了抗SjAgo2的单抗（27A9）制备，确定27A9单抗能够特异性识别成虫天然SjAgo2蛋白；利用27A9单抗免疫共沉淀（IP）天然成虫可溶性抗原中的SjAgo2复合物，对IP后SjAgo2结合的small RNA进行了高通量测序，生物信息学分析显示SjAgo2主要结合特定转座子（TE）来源的small RNAs，提示SjAgo2的主要功能可能是通过镇压转座子的转录来维持基因组的稳定性。本研究丰富了日本血吸虫small non-coding RNAs的在不同发育阶段的表达调控信息，增强对日本血吸虫不同发育阶段基因表达调控的认识，同时揭示了小RNA相关蛋白SjAgo2的分子生物学功能，以上发现将为血吸虫病的防控提供新思路。