ChIP-chip检筛PPARγ及其激动剂抗肝癌作用的下游基因

本项目拟采用体外肝癌细胞系培养，以腺病毒为载体，建立过氧化物酶体增殖物激活受体γ（peroxisome proliferator-activated receptors γ, PPARγ）基因过表达体系(Ad-PPARγ)，再以MTS、流式细胞仪检测和动物成瘤模型等方法证实PPARγ作为抑癌基因抑制肝癌细胞的增长、诱导细胞凋亡的作用。然后通过染色体免疫共沉淀和芯片技术的结合(Chromatin Immunoprecipitation-chip, ChIP-chip）高通量检测筛选PPARγ所调控的下游基因，以进一步探讨转录因子PPARγ抑癌的作用机制，探索其与其他相关基因的调控关系。研究结果将为临床肝癌的基因治疗提供新的思路。

在传统治疗方法对肝癌效果不理想的情况下，基因治疗给我们提供了一个新的方向。前期研究发现PPARγ激动剂能抑制恶性肿瘤的生长。本研究以腺病毒为载体，d-PPARγ感染肝癌细胞建立PPARγ基因过表达体系，联合PPARγ激动剂罗格列酮治疗，运用MTS、流式细胞仪、细胞伤口愈合和细胞侵袭试验检测PPARγ对肝癌细胞增殖、细胞周期和调亡、运动能力和侵袭力的影响。建立原位肝癌裸鼠模型，予裸鼠常规鼠粮或鼠粮中加入罗格列酮，生物成像仪器监测小鼠肝脏肿瘤生长和转移情况，为时7周。取出小鼠肝脏和肺组织进行病理组织学的诊断。运用cDNA array和ChIP技术，检测分析PPARγ直接下游调控位点，以进一步探讨转录因子PPARγ抑癌的作用机制，探索其与其他相关基因的调控关系。研究结果将为临床肝癌的基因治疗提供新的思路。