应用基因工程创制甜瓜坏死斑点病毒的弱毒株系

病毒病是西甜瓜的重要病害，新发生的几种由种子、蓟马和烟粉虱传播的病毒病构成了西甜瓜产业持续发展限制的威胁，尤其保护地栽培的西甜瓜遭受了新病毒的严重危害。甜瓜坏死斑点病（Melon necrotic spot virus ，MNSV）是其中发现的一种新病毒病。该病害通过种子、土壤真菌和黄瓜黑头叶甲及摩擦接种传播。种子传毒使病害极易远距离扩展，危害加剧。.瓜类病毒病的防治目前缺乏有效的方法，可以通过转基因抗病毒和弱毒株保护来实现。自然界弱毒株的发现极其困难和盲目。MNSV基因组很小，只有4.3kb,是非常好的基因工程材料，易于操作。本项目在获得全基因组和构建了侵染性克隆的基础上，运用基因工程手段对MNSV基因组进行改造，构建能够系统侵染但不致病的弱毒株系，利用该弱毒株系的保护作用达到防治病害的目的，该项目的顺利实施可为其它植物病毒弱毒株的分子构建奠定基础,从而开辟瓜类病毒病害防治的新途径。

病毒病是西甜瓜的重要病害，尤其对保护地栽培的西甜瓜危害严重。弱毒株保护是一种防治病毒病侵染的有效方法之一。本项目拟在获得全基因组和构建了侵染性克隆的基础上，运用基因工程手段对基因组进行改造，构建能够系统侵染但不致病的弱毒株系突变体，利用该弱毒株系的保护作用达到防治病害的目的。甜瓜坏死斑点病（Melon necrotic spot virus，MNSV）是一种在中国大陆发现的新病毒病，严重危害甜瓜生产。本研究构建了MNSV的T7启动子的多个全长基因克隆，体外转录物RNA接种甜瓜子叶期幼苗。同时也构建了35S启动子启动的全长克隆的表达载体，利用农杆菌注射的方法进行了多次接种实验。结果证实这两种克隆都不能引起接种苗表现症状，通过RT-PCR和DAS-ELISA都没有检测到病毒cp基因，因此说明该病毒的克隆载体没有侵染性。.该项目增加了计划外的一个内容。中国南瓜曲叶病毒(Squash leaf curl china virus，SLCCNV)也一种甜瓜新病害，2011年在海南三亚的大棚温室内发现，该病毒属于双生病毒科(Geminiviridae)的菜豆金色花叶病毒属(Begomovirus)，具有孪生颗粒形态的植物单链DNA病毒。本项目首次证实了该病毒侵染甜瓜；研究了该病毒的基因组；并成功构建了该病毒的侵染性克隆载体，能成功接种到甜瓜、黄瓜及西瓜等作物，通过PCR和斑点杂交都能检测到该病毒存在于接种后的植株中。