蕃茄花叶病毒弱毒疫苗N14致弱机理研究

为了全面揭示N14致弱的分子机理，通过反转录、PCR、克隆、体外转录和烟草感染获得了侵染性烟草花叶病毒普通株（U1，TMV-Cv）和弱毒疫苗N14的cDNA克隆；核苷酸序列测定发现，N14基因组中复制酶和运动蛋白（MP）发生了乳石和赭石突变；用基因交换法构建了普通株和N14的嵌合病毒，体外转录和侵染性分析确定了主要致弱区；用点突变的方法分别构建了普通株和N14的3个突变体，侵染性分析表明N14突变的复制酶和MP对该病毒的致弱分别起主要和次要作用；转复制酶和MP基因植物的交叉保护试验和缺损病毒的侵染结果暗示，N14基因组的这种突变是其致弱和交叉保护的根本原因，可用于对其他植物病毒基因组的改造和致弱研究。