人正常肝细胞乙肝病毒表面抗原受体蛋白的淘选及其在乙肝病毒入侵与建立感染过程中的作用

本项目计划利用乙型肝炎病毒表面抗原（HBsAg）作为淘选配基，对人正常肝细胞cDNA的噬菌体展示肽库进行淘选，得到阳性克隆基因组中插入的外源受体蛋白的cDNA序列。再于大肠杆菌中表达该受体蛋白并分离纯化，制备单克隆抗体。同时把该cDNA连接到真核表达载体，转染人非肝来源细胞系或鼠源细胞系，用共聚焦显微镜观察HBV与细胞结合的情况以证实其受体蛋白性质。然后通过抗体阻断、RNA干扰等技术研究该受体蛋白的功能。以往有关乙肝病毒受体的研究都使用癌化的细胞株，这些细胞株相对正常肝细胞发生了变异，其HBV受体蛋白是否有差异还不清楚。该研究可以方便地淘选到正常肝细胞与HBsAg结合的受体蛋白的cDNA，这类受体蛋白目前国内外均未见报道，对于揭示HBV感染机制及开发新型HBV疫苗都具有较大的意义。在此基础上，利用本教研室建立的蛋白质组学研究平台，深入研究该受体蛋白在HBV入侵及建立感染过程中的生物学功能。