采用SPAD方法发现新的肿瘤/睾丸抗原

由于肿瘤抗原的低免疫原性和肿瘤细胞多种免疫逃逸机制，使肿瘤免疫治疗无法取得显著进展。肿瘤/睾丸抗原（CTA）的发现，为肿瘤免疫治疗带来新希望。CTA对全面认识肿瘤发生的分子机制、促进肿瘤免疫诊断和治疗的发展具有非常重要的意义。目前已有筛选方法，因其本身的局限性限制了它们的广泛应用。本课题拟利用CTA限制性表达于睾丸组织的特点，建立一种新的筛选和鉴定未知CTA方法（SPAD）。以人生精细胞免疫小鼠，收集免疫血清（含生精细胞特异性多抗），并以此多抗行免疫细胞化学染色筛选人睾丸cDNA NIH3T3细胞表达文库，通过激光显微切割分离阳性细胞，单细胞PCR技术扩增睾丸特异性分子，测序并检索数据库，获得全长序列。根据这些分子的表达谱，确定候选CTA分子。制备候选CTA分子单抗，在蛋白水平明确候选分子的表达规律，确定新的CTA分子，为肿瘤治疗提供更多新候选靶分子，为肿瘤疫苗设计提供新思路和策略。

由于肿瘤抗原的低免疫原性和肿瘤细胞多种免疫逃逸机制，使肿瘤免疫治疗无法取得显著进展。肿瘤/睾丸抗原（CTA）的发现，为肿瘤免疫治疗带来新希望。CTA对全面认识肿瘤发生的分子机制、促进肿瘤免疫诊断和治疗的发展具有非常重要的意义。目前已有筛选方法，因其本身的局限性限制了它们的广泛应用。.本课题利用CTA限制性表达于睾丸组织的特点，建立了一种新的筛选和鉴定未知CTA方法（SPAD）。以人生精细胞免疫小鼠，收集免疫血清（含生精细胞特异性多抗），并以此多抗行免疫细胞化学染色筛选人睾丸cDNA NIH3T3细胞表达文库，通过激光显微切割分离阳性细胞，单细胞PCR技术扩增睾丸特异性分子，测序并检索数据库，获得全长序列。根据这些分子的表达谱，确定候选CTA分子。. 经过课题组成员三年的努力，成功建立了SPAD方法，进行了上千次的激光显微切割，经过测序获得了297个在睾丸组织中表达的分子的基因序列，在此基础上，确定了4种CTA候选分子。重组表达了4种分子并成功制备了可用于免疫组织化学染色的候选CTA分子的单抗，免疫组化结果显示，2个分子定位于细胞膜，1个分子定位于胞浆，另外1个分子定位于细胞核。进一步的免疫组化结果显示，4种分子在睾丸组织和多种肿瘤组织中高表达，正常组织中低表达，符合CTA的表达分布规律。4种新的CTA的发现必将为肿瘤治疗提供更多新候选靶分子，为肿瘤疫苗设计提供新思路和策略。. 在基金的资助下发表了3篇SCI收录论文，单篇最高影响因子4.555。获国家实用新型专利授权2项。