基于在位内膜的“3A程序”和NF-κB/MAPK信号通路研究消瘤方干预子宫内膜细胞增殖的作用机制

Traditional Chinese medicine of XLF is experience in the treatment of endometriosis in our hospital, the clinical curative effect, can reduce the recurrence rate, promote fertility, but the mechanism has not been fully elucidated.Pilot study preliminarily confirmed the prescription can promote apoptosis of ectopic endometrial cells and stem cells, to shrink ectopic lesions, fade.Recent studies have shown that in endometrium of the uterus cell adhesion, invasion and angiogenesis (“3A program”) and the activation of NF - κB/MAPK signaling pathway is an important mechanism of the endometriosis.On this basis, we propose TCM of XLF whether elimination by blocking the NF - κB/MAPK signal pathway, intervening in endometrial cells adhesion - attack - a trilogy of angiogenesis, to suppress the proliferation of ectopic lesions, so as to achieve from the source control in endometriosis hypothesis.In order to verify that it is, this research intends to extract in endometriosis patients in，ectopic endometrial tissue and normal, for in vitro culture, and appraisal, by adding different concentrations of XLF drug-containing serum, determined by related technologies after the detection of TCM intervention affect cell adhesion, invasion ,migration, proliferation, apoptosis of endometrial cells and "3A program" core factor and NF - κB/MAPK factor expression changes;Simultaneously in endometriosis model in rats in vivo experiment, from the level of cells, molecules, protein, apoptosis, to clarify XLF effective mechanism of endometriosis prevention and control.

消瘤方是我院治疗内异症的经验方，临床疗效确切，可降低复发率，促进生育，但作用机制尚未完全阐明。前期研究初步证实，该方可促进异位内膜细胞及干细胞发生凋亡，使异位病灶萎缩、消退。新近研究表明，子宫在位内膜细胞的粘附、侵袭和血管生成（即“3A程序”）和NF-κB/MAPK信号通路的激活是内异症发病的重要机制。据此，我们提出消瘤方是否通过阻断NF-κB/MAPK信号通路，从而干预子宫内膜细胞的“3A程序”来抑制内膜细胞异常增殖，达到从源头上防治内异症的假说。为了验证这一推断，本研究拟提取内异症患者在位、异位及正常人子宫内膜组织，进行体外培养、鉴定，通过加入不同浓度的消瘤方含药血清，采用相关技术检测中药干预子宫内膜细胞粘附、侵袭、迁移、增殖、凋亡能力和“3A程序”核心因子及NF-κB/MAPK因子表达的变化；同时进行内异症大鼠模型在体实验，从细胞、分子、蛋白、凋亡水平，阐述消瘤方防治内异症的有效机制

子宫内膜异位症(EMs)是妇科常见病、疑难病，其引起的疼痛、不孕、复发等问题已是目前妇科领域研究的热点和难点。EMs的发病机制错综复杂，涉及多种因素、多种机制。虽为良性疾病，但具有侵袭、转移、复发等恶性表现，临床上治疗效果有限。因此，进一步探究其发病机制，针对EMs 发病相关的关键靶点进行联合治疗，将有助于提高临床治疗效果。研究表明，子宫在位内膜细胞的粘附、侵袭和血管生成（即“3A程序”）和NF-κB/MAPK信号通路的激活是内异症发病的重要机制。近年来中医药治疗EMs在临床实践中已凸显出优越性，根据肾虚血瘀的病机凝练出的消瘤方是我院名中医治疗EMs的经验方，临床疗效确切，复发率低，但机制尚未阐明。课题组结合现代医学的最新研究，提出消瘤方是否通过阻断NF-κB/MAPK 信号通路，从而干预子宫内膜细胞的“3A 程序”来抑制内膜细胞的异常增殖，达到从源头上防治EMs的假说。为了验证这一假说，本研究提取了EMs患者在位、异位及正常人子宫内膜组织，进行体外培养、鉴定，通过加入不同浓度的消瘤方，采用相关技术检测中药干预子宫内膜细胞粘附、侵袭、迁移、增殖、凋亡能力和“3A程序”核心因子及NF-κB/MAPK因子表达的变化；同时进行内异症大鼠模型在体实验，从细胞、分子、蛋白、凋亡水平，阐述消瘤方防治内异症的有效机制。通过本研究得出结论：1）波形蛋白vimentin在EMs患者在位、异位及正常人子宫内膜中呈阳性表达，对其分离、培养，可作为研究EMs发病机制的体外模型。2）消瘤方含药血清的体外干预实验发现，消瘤方高剂量组和西药组可下调NF-κB、MAPKp38mRNA因子的表达，抑制子宫内膜细胞的“3A”能力，降低ICAM-1、COX-2、MMP-9、VEGFmRNA因子的表达，从而抑制子宫内膜细胞的增殖和促进子宫内膜细胞发生凋亡，差异具有统计学意义（P＜0.01或0.05）。3）消瘤方干预EMs模型大鼠的体内实验发现，中药高剂量与西药组异位内膜组织萎缩、消退，同时可下调在位和异位内膜细胞中NF-κB、MAPKp38、ICAM-1、COX-2、MMP-9、VEGF蛋白表达的趋势，并且具有诱导子宫内膜细胞发生凋亡的作用。由此证实补肾活血法治疗EMs的有效机制，为中医药防治内异症提供新的思路和治疗策略。