p38MAPK信号通路激活致青光眼小梁细胞早衰的机制研究

眼压升高是青光眼最主要的危险因素，明确眼压升高机制对临床治疗至关重要。我们前期研究发现青光眼小梁细胞出现早衰，首次提出氧化应激介导的小梁细胞早衰可能是导致青光眼眼压升高的重要环节，p38MAPK信号通路激活与小梁细胞氧化应激介导的早衰有关，但目前这一作用机制仍未阐明。本研究拟通过对正常人和开角青光眼小梁细胞形态学和细胞早衰分子标记的比较分析，确认p38MAPK激活在小梁细胞早衰中起关键作用；建立正常及青光眼小梁细胞慢性氧化应激及MKK3/MKK6/p38MAPK负表达模型，进一步验证p38MAPK信号通路激活介导小梁细胞的氧化应激和早衰；最后在器官培养水平，建立p38MAPK高度激活的人眼前段器官模型，比较器官模型与开角青光眼患者小梁网早衰的病理改变及房水外流阻力。本研究以小梁细胞早衰导致眼压升高为切入点，从新的视角对p38MAPK信号通路激活进行研究，为青光眼治疗寻找新靶点。

青光眼是严重的不可逆性致盲眼病。眼压升高是青光眼主要危险因素，明确眼压升高机制对临床治疗至关重要。本研究通过对正常人和开角型青光眼小梁细胞形态学和细胞早衰分子标记比较分析，确认p38MAPK激活在小梁细胞早衰中起关键作用；建立正常及青光眼小梁细胞慢性氧化应激及MKK6负表达模型，进一步验证p38MAPK信号通路激活介导小梁细胞的氧化应激和早衰。.我们发现，与年龄匹配的正常人小梁细胞（HTM）相比，开角型青光眼患者小梁细胞（GTM）SA-β-gal染色阳性率较HTM增高，更多细胞处于G1 期，提示GTM衰老程度较同年龄HTM重。GTM中p-MKK6与p-p38高表达，p38MAPK途径被激活。因此，我们首次提出氧化应激介导的小梁细胞早衰可能是导致青光眼眼压升高的重要环节，p38MAPK信号通路激活与小梁细胞氧化应激介导的早衰有关。.我们成功构建HTM氧化应激及阻断p38MAPK途径的HTM氧化应激模型。氧化应激HTM皱缩、贴壁率减少，活性降低，蛋白酶体的糜蛋白酶样酶活性降低，细胞凋亡增多；阻断p38MAPK途径后，HTM上述改变均减轻。提示阻断p38MAPK途径可减轻正常人小梁细胞氧化应激引起的细胞凋亡。.我们构建MKK6干扰载体，成功转染入HTM及GTM中，造成MKK6负表达细胞模型。通过衰老分子标记比较，发现MKK6负表达部分逆转HTM及GTM细胞衰老发生。在HTM及GTM细胞氧化应激模型中，彗星电泳及γ- H2AX表达水平检测显示，GTM的DNA损伤情况较HTM重；而p38MAPK通路活性下调，可增强HTM及GTM细胞对氧化应激的耐受，DNA损伤程度减轻；可使GTM抗氧化损伤能力提高，使之逼近正常细胞的水平，提示p38MAPK通路是青光眼发病过程中的一个重要通路。进一步对p38MAPK通路下游靶点ATF3及衰老相关的p16INK4A、p21waf-1的表达进行检测。抑制p38MAPK途径后，上三者水平相应降低。提示p38MAPK通路抑制，通过ATF3、P16INK4A和p21waf-1对小梁网细胞SIPS调节。最后，我们拟建立人眼前段器官模型，比较器官模型与开角型青光眼患者小梁网的早衰病理学改变及房水外流阻力。.本研究以小梁细胞早衰导致眼压升高为切入点，从新的角度针对p38MAPK信号通路激活进行研究，为青光眼治疗寻找新靶点。