细胞色素P450 2E1抑制剂对乙肝病毒感染所致细胞外基质分泌的抑制作用及其机制

细胞色素P450 2E1（CYP2E1）是肝脏中产生活性氧主要的来源，过表达CYP2E1的肝细胞可引起星状细胞分泌细胞外基质增加，而CYP2E1抑制剂可通过上调MMP-1阻断此效应，但其机制仍不清楚。我们在前期研究中发现HBV感染引起肝细胞产生活性氧增加，而HBV感染肝组织中CYP2E1表达明显增加，提示：HBV感染可诱导CYP2E1表达并引起活性氧增加，CYP2E1抑制剂对HBV感染引起的细胞外基质分泌增多可能具有抑制作用。本研究以HBV感染肝细胞、肝星状细胞和巨噬细胞的共培养体系作为研究载体；观察HBV感染对活性氧水平、促纤维化因子和细胞外基质的作用及CYP2E1抑制剂干预对上述因素的影响；观察CYP2E1抑制剂对MMP-1表达、参与MMP-1调控的转录因子及信号通路的影响；阻断相应信号通路后观察MMP-1及细胞外基质的变化；初步明确CYP2E1抑制剂可能的抗纤维化作用及其机制。

活性氧（ROS）是机体代谢过程中产生的含氧的分子，正常情况下机体中的抗氧化体系会中和内源性活性氧，氧化产物的增多和（或）抗氧化能力的降低则会导致氧化应激的产生。一些研究证实慢性乙肝病毒感染导致的肝细胞损伤与氧化应激相关，在本研究中我们也发现乙肝病毒感染的肝细胞产生ROS增加。细胞色素P450 2E1 (CYP2E1)是人肝脏中产生ROS的主要来源之一。ROS和脂质过氧化物被证实与肝纤维化的发生与发展密切相关，而有研究显示过表达CYP2E1的肝细胞可引起肝星状细胞分泌细胞外基质增加。在前期发现的CYP2E1抑制剂DDC可抑制胶原水平的基础上，在本研究中，我们对以HBV感染肝细胞、肝星状细胞和巨噬细胞的共培养体系作为研究载体；观察HBV感染对活性氧水平、促纤维化因子和细胞外基质的作用及CYP2E1抑制剂干预对上述因素的影响；观察CYP2E1抑制剂对MMP-1表达、参与MMP-1调控的转录因子及信号通路的影响；阻断相应信号通路后观察MMP-1及细胞外基质的变化；初步明确CYP2E1抑制剂可能的抗纤维化作用及其机制。我们在研究中成功建立了乙肝病毒感染细胞与人肝星状细胞和巨噬细胞共培养体系。在乙肝感染患者的肝组织中及HBV感染的肝细胞系中均可观察到CYP2E1在基因水平和蛋白水平的增加。而乙肝病毒感染的肝细胞与人肝星状细胞和巨噬细胞共培养后，可引起这两种细胞活性氧水平的增加。HBV感染共培养体系中的肝星状细胞中I型胶原、TIMP-1表达增加，而MMP-1表达水平降低。DDC可抑制ROS的产生，显著上调肝星状细胞和巨噬细胞中MMP-1的表达，下调肝星状细胞中I型胶原的表达。进一步的研究发现DDC上调MMP-1的作用与ERK1/2及Akt信号通路的激活相关。上述研究结果说明乙肝病毒感染导致的氧化应激促进了胶原的合成，而CYP2E1抑制剂DDC可通过降低氧化应激和上调MMP-1水平降低胶原的水平，说明DDC有可能对肝纤维化具有潜在的治疗作用。但其确切作用需要进一步的体内试验加以验证。