贵州苗族熏蒸法调控早期KOA家兔软骨、滑膜及软骨细胞MAPK信号通路机制研究

Fumigation method is widely used in the treatment of osteoarthritis in qiandongnan of Guizhou region an external treatment method of, the curative effect.Research Group has long been working on the fumigation of the Miao nationality in Guizhou, upfront from the theory, practice, study formula, filtering, and so on, and to the treatment of early osteoarthritis of the knee (KOA) represented, study its mechanisms.Results suggest that of KOA model in rabbits by pain behavior and there has been significant improvement function of knee joint;Prove that fumigation prevents articular cartilage and bone damage from occurring.So, whether the fumigation will cause KOA- - -MAPK start of articular cartilage and bone damage factors influence signal pathway also produces?Based on this, our research are: further research targeting a clear positioning in the articular cartilage and chondrocytes, whole-tissue-cells for research.Macro used overall experimental, and micro-from cell biology experimental observation Guizhou Miao fumigation on joint cartilage, and sliding film and the cell behavior learn, and morphology and super micro-structure of role, further from signal pathway of angle, research Miao fumigation method on KOA of cell factor, and metal protease, and cell apoptosis died of effect, discussion Miao fumigation method confrontation early KOA damage of signal pathway mechanism, gives seedlings medical "drive HIV" theory to science of meaning.

熏蒸法是贵州黔东南地区广泛运用于治疗骨关节炎的一种外治方法，疗效肯定。课题组长期以来致力于研究贵州苗族熏蒸法，前期从理论、操作规范、验方筛选等进行了研究，并以该法治疗早期膝骨性关节炎（KOA）为代表，研究其效应机制。结果提示该法对KOA模型大鼠的痛行为及膝关节活动有明显的改善作用；证明熏蒸法可以阻止关节软骨和骨损害的发生。那么，熏蒸法是否会对引起KOA关节软骨及骨的破坏的启动因素- - -MAPK信号通路同样产生影响呢？基于此，我们的研究思路是：进一步将研究靶点明晰定位于关节软骨和软骨细胞，从整体-组织-细胞层面进行研究。宏观采用整体实验、微观从细胞生物学实验观察贵州苗族熏蒸对关节软骨、滑膜及细胞行为学、形态学和超微结构的作用，进一步从信号通路的角度，研究苗族熏蒸法对KOA的细胞因子、金属蛋白酶、细胞凋亡的影响，探讨苗族熏蒸法对抗早期KOA破坏的信号通路机制，赋予苗医"驱毒"学说以科学的含义。

本课题在前期研究基础上，将研究靶点定位于关节软骨及软骨细胞，从整体-组织-细胞层面进行研究，采用膝关节腔内注射木瓜蛋白法进行造模，宏观采用整体实验、微观从细胞生物学角度观察贵州苗族熏蒸疗法对关节软骨、滑膜及细胞行为学、形态学和超微结构的作用，进一步探讨该法对细胞因子、基质金属蛋白酶、细胞凋亡因子的影响。通过光镜及扫描电镜的观察得到：KOA模型的是制备成功的，苗药熏蒸疗法可以延缓关节软骨的退变，抑制炎症。毒理实验研究得出:苗药熏蒸处方急性毒性实验无毒副作用，长期毒性实验有毒副作用，临床使用安全。通过基因检测技术得到：苗药熏蒸治疗早期KOA得到符合有效信号标准的基因总数有23283个，其中共有744个表达差异显著的基因，有431个基因的表达下调，有313个基因表达上调。通过对苗药熏蒸治疗骨性关节炎的基因进行功能分析得到744个DEG在生物学的过程上有显著性的GO分类，其生物学过程主要涉及到炎症反应、细胞的增值、细胞分化、经典的Wnt信号传导、蛋白质、核苷酸、脂质的代谢等，其中的Wnt11、STAT1、AGTR2基因参与了多个生物学过程。对这些差异基因进行Pathway信号通路分析：苗药熏蒸法治疗早期KOA后的软骨组织的改变涉及了比较重要的信号通路：Wnt信号通路、JAK-STAT信号通路、MAPK信号通路、破骨细胞分化因子。通过western blot蛋白检测技术结果得到：苗药熏蒸疗法对早期KOA具有一定疗效，且苗药熏蒸治疗组疗效优于清水对照组，能够有效调控炎症因子、细胞凋亡因子、金属蛋白酶的表达，从而有效抑制炎症的发展、细胞凋亡等，改善膝关节软骨及骨的损害，有效防治膝骨性关节炎的发生发展，为临床疗效提供科学的理论依据。