伸筋易骨法调节KOA兔膝关节应力影响软骨细胞代谢的力学-生物信号转导机制研究

Shenjinyigu is the Chinese medicine though that pays equal attention to bone and muscle,which is an effective treatment for the knee osseous arthritis (KOA), Clinical studies show that Shenjinyigu can significantly alleviate the patients' clinical symptoms.Experimental studies indicated Shenjinyigu improves function of unbending, adjusts knee soft tissue stress balance, protects articular cartilage, reducing the chondrocyte apoptosis. This study uses the entire membrane patch clamp, Immunohistochemical,RT-PCR to observe the impact of Shenjinyigu manipulation on KOA in rabbit cartilage cell membrane calcium channels, Intracellular concentration of calcium ion,PTHrP and PTHrPmRNA. To annonce how the Shenjinyigu To affect the metabolism of cartilage cells,controlling KOA. This provided scientific basis for clinical usage of Shenjinyigu.

伸筋易骨法是中医骨伤筋骨并重思想在临床的具体应用，是膝关节骨性关节炎（KOA）有效的治疗手段，前期临床研究表明伸筋易骨法可明显缓解KOA患者临床症状。前期实验研究表明伸筋易骨法可调节膝关节周围软组织的应力平衡，减少软骨细胞凋亡。本研究基于软骨细胞力学-生物信号转导通路，采用全细胞膜片钳、免疫组化、RT-PCR等技术观察伸筋易骨法对兔KOA软骨细胞膜钙离子通道、细胞内钙离子浓度、甲状旁腺激素相关蛋白(PTHrP)及其转录基因表达的影响。揭示伸筋易骨法影响软骨细胞代谢、防治KOA的内涵，论证中医筋骨整体调节的科学意义,探究应力影响软骨细胞的生长、增殖和代谢的机制，为伸筋易骨法的科学应用提供依据。

膝关节骨性关节炎(KOA)是一种常见的慢性关节疾病，其主要的症状是膝关节疼痛、肿胀、畸形和功能障碍。在诸多保守治疗方案中，推拿手法疗效显著且没有明显的副作用，临床中受到广大KOA患者的认同。前期研究表明伸筋易骨法可调节膝关节周围软组织的力学性能，改善关节应力环境，因此本项目从软骨细胞力学-生物信号转导通路出发，分析关节周围软组织张力，通过TUNEL、流式细胞术等检测各组软骨细胞增殖凋亡情况，采用全细胞膜片钳、激光共聚焦显微镜检测各组软骨细胞钙离子电流及钙离子分布，Western Blot、 RT-PCR 等技术检测软骨细胞合成代谢相关蛋白的表达。结果显示：伸筋易骨法能有效调节膝关节前后肌群的粘弹性，提升肌肉性能，增加膝关节力学稳定性；软骨组织病理切片及细胞培养计数显示伸筋易骨法能够降低软骨组织破坏；组化染色显示伸筋易骨法能够减少KOA软骨细胞中的肥大细胞数量，调节软骨细胞分泌功能；TUNEL及流式细胞术检测发现伸筋易骨法能够降低原代软骨细胞的凋亡比例；全细胞膜片钳和激光共聚焦显微镜检测发现伸筋易骨法能够加快Ca2+内流，增加软骨细胞内Ca2+浓度；Western Blot、 RT-PCR检测伸筋易骨法能够增加软骨细胞合成代谢相关蛋白的表达。综合本项目的研究结果，我们认为伸筋易骨法通过调节关节周围软组织性能，降低细胞表面应力集中，软骨外基质的结构形态改变将力学信号传导至细胞表面，并影响软骨细胞周围阳离子浓度，提高软骨细胞膜的静息膜电位，活化软骨细胞表面L型钙通道，增加软骨细胞内Ca2+浓度，进而引发软骨细胞合成代谢相关蛋白表达水平的变化，达到防治KOA的目的。本项目的研究论证了推拿手法防治KOA的可能机制，即通过调节膝关节周围软组织性能，恢复关节应力环境，揭示了手法防治KOA的内在机制，充分印证了“调筋治骨，筋骨并重”的中医思想。