C-末端切割对E2F2功能及神经元凋亡的调控

细胞周期素依赖的蛋白激酶(Cyclin-dependent Kinases, CDKs）介导了神经元凋亡，但我们证明其下游重要的转录因子E2F1对撤钾诱导神经元凋亡并不必需。 那么，E2F家族中哪个成员对神经元凋亡起重要作用？预实验结果显示撤钾诱导凋亡不依赖E2F4/B-Myb/C-Myb通路及E2F3。进一步实验显示：神经元凋亡早期E2F2 C-末端被切割，caspases抑制剂Z-VAD及特异的caspase 3抑制剂DEVD有效抑制了E2F2的切割。体外切割实验证实caspase3直接切割E2F2 C-末端。由此我们提出：神经元凋亡时转录因子E2F2被caspase 3切割修饰，切割产物促使神经元凋亡。本项目拟主要采用免疫沉淀、体外翻译、体外切割、点突变和siRNA等方法，获得E2F2及其切割产物调控神经元凋亡的直接证据。本课题将阐明一种E2F家族蛋白调控神经元凋亡的新机制。

CDK/Rb通路在神经元凋亡中发挥重要作用，但下游机制尚不清楚。我们发现下游转录因子E2F2在神经元凋亡早期被Caspase 3切割，提示E2F2及其切割产物有可能参与调控凋亡，但随后的研究发现无论E2F2还是其切割产物并不调控神经元凋亡和存活。于是我们重点研究了E2F1的功能，结果表明E2F1转录活性依赖地促进小鼠小脑颗粒神经元凋亡但对大鼠神经元具有保护作用。我们的研究结果首次证实E2F2不介导神经元凋亡，而E2F1调控神经元凋亡具有种属特异性且依赖转录活性。本课题完成对认知CDK/Rb下游转录因子E2F1及E2F2在神经元凋亡和存活中的作用具有重要理论意义。