一种新型前列腺癌特异性杀伤T细胞治疗前列腺癌的实验研究

前期研究发现：转染了II型TGF-β受体显性负突变基因（TβRIIDN）的免疫细胞能克服肿瘤免疫抑制，有效治疗肿瘤，结果已发表于Clinic Cancer Res等杂志。在此基础上，提出一新的免疫治疗方案：利用抗前列腺特异性膜抗原（PSMA）单抗-ScFvJ23和TβRIIDN构建嵌合抗原受体慢病毒载体，转染T细胞，以此PSMA反应性TGF-β不敏感的CD8+ T细胞治疗前列腺癌。初步体外实验证实：这种T细胞不但可以拮抗肿瘤免疫抑制，且能特异性识别表达PSMA 的癌细胞，并继发性活化、进而有效杀伤瘤细胞，显示出很好的效果。进而我们拟利用SCID鼠，建立10-20例个体化人前列腺癌荷瘤鼠模型，以此为"临床体内治疗载体"，将此新型前列腺癌特异杀伤性T细胞输入相应"载体"内，检测其体内抗肿瘤疗效、安全性及其机制。本项目是对以往免疫治疗方案的优化与创新，更接近临床，将为前列腺癌治疗开辟一种新方法。

肿瘤的过继性免疫治疗已成为一种新的肿瘤治疗方法。前期研究发现，转染了II型TGF-β受体显性负突变基因（TβRIIDN）的免疫细胞能克服肿瘤免疫抑制而有效治疗肿瘤。在本研究中，我们利用前列腺特异性膜抗原（PSMA）作为免疫杀伤靶抗原，同时通过对CD8+T细胞转染TβRIIDN基因以克服肿瘤免疫抑制，从而建立一种新的前列腺癌免疫治疗方法。首先，我们将课题组已有的TβRIIDN基因表达载体和人源性抗PSMA胞外区单链抗体ScFvJ23基因，利用基因重组技术构建了携带ScFvJ23和TβRIIDN-ζ嵌合受体基因的载体包装慢病毒。实验过程中，我们一共对185例前列腺癌患者的肿瘤组织进行了SCID小鼠接种，成功建立了12例前列腺癌以异种移植瘤模型，经验证移植瘤良好的保留了原代肿瘤的分化程度、形态特征、结构特点。我们收集了临床前列腺癌患者外周血并分离了外周血单个核细胞（PBMC）和CD8+T细胞。利用上述慢病毒感染CD8+T细胞分别制备PSMA特异性TGF-β不敏感的CD8+T细胞和PSMA特异性CD8+ T细胞。体外杀伤实验结果显示，PSMA特异性TGF-β不敏感的CD8+T细胞对CWR22和LNCaP细胞的杀伤效果明显优于PSMA特异性CD8+ T细胞。我们利用患者来源的PBMC对荷瘤SCID小鼠进行免疫系统重建，并成功在6组荷瘤SCID小鼠外周血中检测到人IgG的表达，成功建立了免疫重建SCID小鼠的前列腺癌异种移植瘤模型，较好的模拟了人前列腺癌及其免疫环境，为研究前列腺癌与免疫治疗的关系建立了良好的平台。过继性输注PSMA特异性TGF-β不敏感的CD8+T细胞以治疗免疫重建SCID小鼠前列腺癌移植瘤，实验发现，PSMA特异性TGF-β不敏感的CD8+T细胞能有效的抑制移植瘤的生长并显著延长荷瘤小鼠的生存时间。我们进一步通过实验发现PSMA特异性TGF-β不敏感的CD8+T细胞可激活免疫重建荷瘤SCID小鼠IL-2和IFN-γ的分泌并促进肿瘤细胞的凋亡，且PSMA特异性TGF-β不敏感的CD8+T细胞仅在荷瘤小鼠体内持续存在，而在无荷瘤小鼠体内可被有效清除。本研究所建立的免疫重建SCID小鼠前列腺癌异种移植瘤模型，良好的模拟了人前列腺癌及其免疫环境，为前列腺癌的研究提供了良好的平台。PSMA特异性TGF-β不敏感的CD8+T细胞过继性治疗为前列腺癌提出了新的治疗方法。