激活雌激素受体对α-分泌酶ADAM9表达水平和活性的调节及作用机制

β-淀粉样多肽（amyloid beta-peptides，Aβ）在脑内的生成增多和过度沉积是阿尔茨海默病（alzheimer's disease, AD）发病的核心基础，α-分泌酶酶切途径能够阻止Aβ生成。雌激素能够上调α-分泌酶酶切活性，但作用机制仍不清楚。前期工作中我们发现雌二醇能够增加α-分泌酶ADAM9启动子表达水平，从而可能增强其活性。本研究将检测多种雌激素配体与雌激素受体（estrogen receptor ，ERs）亚型的相互作用，ERs激活后对α-分泌酶ADAM9表达水平和酶切活性的影响，并从基因水平探讨ERs与ADAM9启动子区的结合，进而明确雌激素增强α-分泌酶酶切途径的机制。这将是国内、外首次探讨ERs激活后上调α-分泌酶ADAM9表达、增强其活性的作用通路及其在AD发病中的作用机制，将为明确雌激素替代治疗在AD发病中的保护作用提供实验依据。

雌激素能够减少神经毒性Aβ的形成，并产生具有神经保护作用的sAPPα。我们的前期研究发现17β-雌二醇（E2）能够上调α-分泌酶ADAM9启动子表达。本研究中，我们旨在探讨激活两种雌激素受体（ERs）亚型对ADAM9表达的影响及作用机制。我们首次发现，10nM E2处理SH-SY5Y细胞后，能够使细胞内ADAM9 mRNA和蛋白表达水平上调，具有时间依赖性，24h达到高峰。E2处理过表达ERα的细胞，能够使ADAM9表达水平明显增多，蛋白表达上调3.5倍。而E2处理过表达ERβ的细胞，则对ADAM9 mRNA和蛋白表达无影响。应用E2、非选择性雌激素受体拮抗剂ICI 182780、选择性ERα激动剂PPT和选择性ERβ激动剂动剂DPN处理细胞后，也证实了上述结论。E2和PPT能够增加ADAM9启动子、mRNA和蛋白表达水平，预先加入ICI 182780，能够阻断E2对ADAM9表达的上调作用， DPN处理后对ADAM9表达无明显影响，上述结果说明ERα 和 ERβ 在ADAM9 表达中的作用是不同的。稳定转染APP751的SH-SY5Y细胞组培养液中,Aβ40含量较未转染组和空载体组明显升高，而应用E2处理稳转APP751组细胞24后，培养液中Aβ40的含量较未处理组明显减少，同时sAPPα水平增加3.2倍。 应用ICI 182,780抑制雌激素作用后，sAPPα 蛋白水平即下降。CHIP试验显示，ADAM9启动子在生理环境下能与ERα结合，而不能够与ERβ结合。而在EMSA试验中，我们没有发现ADAM9启动子区-512位点的雌激素反应元件（ERE）与核蛋白结合，ERα或ERβ与ADAM9启动子ERE位点在人工环境中未发现结合。另外，我们也发现植物雌激素大豆异黄酮能够使SH-SY5Y细胞、LNCaP细胞内ADAM9启动子转录活性增加约1.5倍。但是在HeLa细胞中，我们没有观察到大豆异黄酮对ADAM9启动子转录活性的影响。我们的研究结果提示ERα在E2调控ADAM9表达过程中发挥重要作用，可能与ADAM9基因启动子区ERE结合而调控基因表达。