猪繁殖与呼吸综合征病毒2b蛋白稳定表达细胞株的建立及其作为离子通道蛋白的研究

猪繁殖与呼吸综合征病毒（PRRSV）是一种引起母猪繁殖障碍和仔猪呼吸道症状并导致高死亡率的病毒，给养猪业带来巨大的经济损失。目前对PRRSV的防控是兽医工作中非常棘手的问题，甚至出现猪注射PRRSV疫苗后反而促使了更高发病率的现象。病毒离子通道的研究为防治病毒性疾病提供了新的希望，有人认为2b蛋白是PRRSV的一种离子通道蛋白，在病毒的感染和复制中起到关键作用，本研究拟建立2b蛋白稳定表达的细胞株，通过膜片钳技术研究其与细胞离子通道间的关系，探寻它在病毒吸附、穿入宿主细胞机制中的作用，这将为全面认识PRRSV感染机制，并进一步研究PRRSV新型疫苗和筛选特效离子通道开放剂或阻断剂奠定基础，从而为PRRSV的防治提供实质性的理论指导和技术支持。

猪繁殖与呼吸综合征病毒（PRRSV）是一种引起母猪繁殖障碍和仔猪呼吸道症状并导致高死亡率的病毒，给养猪业带来巨大的损失。2b蛋白是PRRSV的一种小结构蛋白，在病毒的感染和复制中起到关键作用。本项目利用RT-PCR方法获得2b蛋白基因，并将其插入到真核表达载体pEGFP-N1多克隆位点，利用脂质体将重组表达载体pEGFP-N1-2b转染至Marc-145细胞，通过荧光蛋白的表达进行细胞株筛选，利用Western Blot技术检测到2b蛋白在Marc-145细胞内成功表达。通过膜片钳技术研究2b蛋白与细胞离子通道间的关系，探寻它在病毒吸附、穿入宿主细胞机制中的作用，经过反复试验，测定结果均不理想，鉴于本研究的科学意义，课题组将利用其他经费继续该项工作的研究，为进一步研究2b蛋白与宿主细胞的结合方式、作用机理以及全面认识PRRSV感染机制作出贡献。