猪繁殖与呼吸综合征病毒GP5a蛋白的功能研究

GP5a protein of porcine reproductive and respiratory syndrome virus was newly founded viral protein. At present, the roles of GP5a protein in host cells and in virus replication are both unclear. In order to reveal the roles of GP5a protein in host cells, the protein subcellular localization of GP5a must be verified. First, reading frame position difference of GP5a protein among different PRRSV genotypes are analyzed by means of bioinformatics and the two secondary structure of highly pathogenic PRRSV GP5a protein was predicted. Second, in order to ascertain the subcellular localization of GP5a proteins, the complete gene and partial gene of GP5a protein was expressed into MARC-145 cells. Third, the nonessential regions of GP5a protein of PRRSV for viral replication are researched by reverse genetic technique or combined with gene deletion and point mutation technology. The project is aimed to announce the role of GP5a protein in virus growth cycle, and clearify the relationship between GP5a and viral pathogenicity

GP5a蛋白是猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)新发现的一种病毒蛋白，目前GP5a蛋白的对宿主细胞的作用及其在病毒复制中的功能都不清楚。为了揭示GP5a蛋白对宿主细胞的作用，本项目首先运用生物信息学手段分析了不同基因型PRRSV之间GP5a蛋白读码框的位置差别，并对我国目前流行的高致病性PRRSV的GP5a蛋白进行了二级结构预测。其次，分别将GP5a全基因及部分基因转入MARC-145细胞中进行表达，以探明该蛋白不同区域在MARC-145细胞中的定位情况。在构建高致病性PRRSV反向遗传操作平台的基础上结合基因缺失和定点突变技术等分子生物学手段探明PRRSV GP5a蛋白的复制非必需区域，初步揭示GP5a蛋白在病毒复制中的功能，并通过对拯救病毒生物特性的研究，进一步明确GP5a的与病毒致病性之间的关系。

猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)的GP5a蛋白是近些年新发现的一种病毒蛋白，为了揭示PRRSV GP5a蛋白的亚细胞定位及其在病毒复制中的作用开展了本研究。本研究通过分子流行病学调查及病毒分离的方法获得目前我国流行的PRRSV毒株；采用将GP5a全基因及部分基因转入MARC-145细胞中进行表达，探明该蛋白不同区域在MARC-145细胞中的定位情况；构建高致病性PRRSV反向遗传操作平台，结合基因缺失和定点突变技术等分子生物学手段探明PRRSV GP5a蛋白的复制非必需区域。结果显示：分离了XX2015株PRRSV病毒，该病毒株仍属于高致病性毒株；亚细胞定位显示该蛋白N段位于细胞外，C段位于细胞内，氨基酸8-30位位于细胞膜中；该蛋白C段5个氨基氨酸为病毒复制的非必需区，但缺失该氨基酸可导致病毒的复制能力下降。该研究揭示了GP5a蛋白在MARC-145细胞中的细胞定位，初步探明了GP5a蛋白在病毒复制中的功能。